Faafetai mo le asiasi ile Nature.com.O le su'esu'ega o lo'o e fa'aogaina e fa'atapula'aina le lagolago a le CSS.Mo le poto sili ona lelei, matou te fautuaina oe e te faʻaogaina se suʻesuʻega fou (pe faʻamalo le Faiga Faʻatasi i Internet Explorer).I le taimi nei, ina ia mautinoa le faʻaauauina o le lagolago, matou te tuʻuina atu le saite e aunoa ma sitaili ma JavaScript.
E tatau ona taula'i fa'a'ave'a o le kenera mo le togafitia o le pulmonary cystic fibrosis i le ea fa'aola, talu ai e leai se a'afiaga o le fa'aogaina o le mama lautele.O le lelei o le viral transduction e fesoʻotaʻi saʻo ma le taimi e nofo ai le vaʻa.Ae ui i lea, o vai e avatu e pei o gene e feaveai e masani lava ona sosolo i totonu o le alveoli i le taimi e manava ai, ma o vaega faʻamalolo o soʻo se foliga e vave ona aveese e felauaiga mucociliary.O le fa'alauteleina o le taimi e nofo ai o lo'o feavea'i le kenera i totonu o le manava e taua ae faigata ona ausia.E mafai ona fa'aleleia atili fa'aitulagi tulimata'i o vaega fa'amaneta fa'apipi'i e ave e mafai ona fa'asaga i luga o le manava.Ona o faʻafitauli i le faʻataʻitaʻiga i vivo, o le amio a ia mea laiti maneta i luga o le ea i luga o le ea i le i ai o se maneta faʻaogaina e le malamalama lelei.O le faʻamoemoe o lenei suʻesuʻega o le faʻaaogaina lea o ata faʻataʻitaʻiga e faʻaalia ai i vivo le gaioiga o se faasologa o vaega maneta i totonu o le trachea o isumu faʻamaʻi ina ia mafai ai ona suʻesuʻeina le malosi ma le faʻataʻitaʻiga o amioga a vaega taʻitasi ma vaega tele i vivo.Na matou iloiloina fo'i pe o le tu'uina atu o vaega fa'amaneta lentiviral i le i ai o se maneta o le a fa'ateleina ai le lelei o le fa'aliliuina i le ala o le isumu.Synchrotron X-ray ata o loʻo faʻaalia ai le amio a mea maneta i totonu o le maneta ma le gaioi i totonu o vitro ma in vivo.E le mafai ona faigofie ona tosoina ni vaega i luga o luga o le ea ola e faʻaaoga ai maneta, ae i le taimi o felauaiga, o loʻo faʻapipiʻi tupe i le vaʻaiga, lea e sili ona malosi ai le mageta.Sa fa'aono fa'asiliina fo'i le lelei o le fa'aliliuina pe a tu'uina atu vaega fa'amageta lentiviral i le i ai o se maneta.Ile tu'ufa'atasia, o nei fa'ai'uga o lo'o fa'ailoa mai ai o lentiviral magnetic particles ma le maneta e mafai ona avea ma auala taua e fa'aleleia atili ai le fa'ata'ita'iina o ga'o ma le maualuga o le fa'aliliuina i ala ea fa'atautaia i vivo.
Cystic fibrosis (CF) e mafua ona o fesuiaiga i se kenera e tasi e taʻua o le CF transmembrane conductance regulator (CFTR).O le porotini CFTR o se alavai ion o loʻo i ai i le tele o sela epithelial i le tino atoa, e aofia ai le ea, o se nofoaga tele i le pathogenesis o cystic fibrosis.O fa'aletonu ile CFTR e mafua ai le felauaiga o le vai, fa'amama le vai o le ea, ma fa'aitiitia ai le loloto o le fa'apa'u o le vai (ASL).E fa'aleagaina ai fo'i le agava'a o le mucociliary transport (MCT) system e fa'amama ai le ea o mea'ai ma fa'ama'i.O la matou sini o le atina'eina lea o le lentiviral (LV) gene therapy e tu'uina atu ai le kopi sa'o o le CFTR gene ma fa'aleleia ai le soifua maloloina o le ASL, MCT, ma le mama, ma fa'aauau le atina'eina o tekonolosi fou e mafai ona fuaina nei ta'iala i vivo1.
LV vectors o se tasi o sui tauva mo le cystic fibrosis gene therapy, aemaise lava ona e mafai ona latou tuʻufaʻatasia tumau le kenera togafitiga i totonu o le ea basal sela (airway stem cell).E taua tele lenei mea aua e mafai ona latou toe faʻaleleia le faʻamamaina masani ma le kilia o le mucus e ala i le faʻavasegaina i sela faʻaogaina o le ea e faʻasaʻoina e gaʻo e fesoʻotaʻi ma cystic fibrosis, e maua ai manuia i le olaga atoa.LV vectors e tatau ona fa'asaga tonu i le ea o lo'o ta'avale, aua o i'ina e amata ai le a'afiaga o le mama i le CF.O le tu'uina atu o le ve'a loloto i totonu o le mama e mafai ona i'u ai i le fa'aliliuina o le alveolar, peita'i e leai se a'afiaga i le cystic fibrosis.Ae ui i lea, o vai e pei o le gene carriers e masani lava ona alu atu i totonu o le alveoli pe a manava pe a uma le fanau3,4 ma faʻamaʻi vailaʻau e vave ona tulia i totonu o le gutu gutu e MCTs.O le lelei o le LV transduction e fesoʻotaʻi saʻo i le umi o le taimi e tumau ai le vevela o le vector i le faʻaogaina o sela e faʻataga ai le faʻaogaina o le telefoni feaveaʻi - "taimi nofomau" 5 lea e faigofie ona faʻapuʻupuʻu e ala ile ea masani faʻaitulagi faʻapea foʻi ma le faʻamaopoopoina o le mucus ma vaega MCT.Mo cystic fibrosis, o le mafai ona faʻaumiina le taimi e nofo ai LV i luga o le ea e taua tele e ausia ai le maualuga o le transduction i lenei vaega, ae ua oʻo mai i le taimi nei o luʻitau.
Ina ia fa'ato'ilaloina lenei fa'alavelave, matou te fa'ailoa atu e mafai e LV maneta (MPs) ona fesoasoani i ni auala fa'aopoopo se lua.Muamua, e mafai ona taʻitaʻia i latou e se maneta i luga o le ea e faʻaleleia ai le tulimataʻiina ma fesoasoani i vaega o loʻo i ai i le itu taumatau o le ea;ma le ASL) fa'asolo i totonu o le cell layer 6. O MP e fa'aaogaina lautele e avea ma ta'avale e tu'uina atu vaila'au fa'atatau pe a fusifusia i antibodies, vaila'au o le chemotherapy, po'o isi molela'au laiti e pipii i sela sela po'o fusia i o latou fa'aulu i luga ole sela ma fa'aputu i nofoaga tumo i totonu. le iai ole eletise fa'aletonu.Fa'amaneta mo togafitiga o le kanesa 7. O isi metotia "hyperthermic" e fa'atatau i le tapeina o sela tumo e ala i le fa'avevelaina o MP pe a fa'aalia i maneta oscillating.O le mataupu faavae o le felauaiga mageta, lea e faʻaaogaina ai le mageta e fai ma sui o le felauaiga e faʻaleleia ai le fesiitaiga o le DNA i totonu o sela, e masani ona faʻaaogaina i vitro e faʻaaoga ai le tele o mea e le o viral ma viral gene vectors mo le faigata-to-transduce laina sela. ..O le lelei o le LV magnetotransfection ma le tuʻuina atu o le LV MP in vitro i totonu o se laina sela o le epithelium bronchial tagata i le i ai o se maneta faʻamau na faʻavaeina, faʻateleina le lelei o le transduction e 186 taimi faʻatusatusa i le LV vector naʻo.LV MT ua faʻaaogaina foʻi i se faʻataʻitaʻiga in vitro o cystic fibrosis, lea na faʻateleina ai le felauaiga maneta i le faʻaliliuina o le LV i aganuu faʻafesoʻotaʻi ea-suavai i se vaega o le 20 i le i ai o le cystic fibrosis sputum10.Ae ui i lea, i totonu o vivo okeni magnetotransfection ua itiiti se gauai atu ma ua na o ni nai suʻesuʻega manu11,12,13,14,15, aemaise lava ile mama16,17.Ae ui i lea, e manino le avanoa o le faʻaogaina o le mageta i le togafitiga o le mama ile cystic fibrosis.Tan et al.(2020) na taʻua ai e faapea "o se suʻesuʻega faʻamaonia i luga o le lelei o le tuʻuina atu o pulmonary nanoparticles mageta o le a saunia ai le auala mo le lumanaʻi CFTR inhalation taʻiala e faʻaleleia ai taunuʻuga falemaʻi i tagata mamaʻi e maua i le cystic fibrosis"6.
O le amio a tama'i vaega mageta i luga o le manava o le manava i le i ai o se maneta faʻaaogaina e faigata ona vaʻaia ma suʻesuʻe, ma o lea e le malamalama lelei ai.I isi suʻesuʻega, ua matou atinaʻeina le Synchrotron Propagation Based Phase Contrast X-Ray Imaging (PB-PCXI) metotia mo le faʻaogaina o ata ma le faʻatusatusaina o minute i vivo suiga i le loloto o le ASL18 ma le MCT19 amio,20 e fua saʻo ai le faʻamamaina o luga o le kesi. ma o lo'o fa'aaogaina e fai ma fa'ailoga vave o togafitiga.E le gata i lea, o la matou metotia fa'ailoga MCT e fa'aogaina ai le 10-35 µm le lautele o vaega o lo'o faia i le alumina po'o le tioata fa'ailoga maualuga e pei o fa'ailoga MCT e va'aia i le PB-PCXI21.O auala uma e lua e fetaui lelei mo le faʻataʻitaʻiina o le tele o ituaiga vaega, e aofia ai MP.
Ona o le maualuga o le fa'afanua ma le fa'aletino, o matou PB-PCXI-fa'avae ASL ma MCT su'esu'ega e fetaui lelei e su'esu'e ai le fa'agaioiga ma fa'ata'ita'iga o le ta'ito'atasi ma le tele o vaega i totonu o vivo e fesoasoani ia i tatou ia malamalama ma fa'amalieina auala tu'uina atu o gene MP.O le auala matou te faʻaogaina iinei e faʻavae i luga oa matou suʻesuʻega e faʻaaoga ai le SPring-8 BL20B2 beamline, lea matou te vaʻaia ai le faʻaogaina o le sua pe a maeʻa le tuʻuina atu o se vailaʻau o se vector i totonu o le nasal ma le pulmonary airways o isumu e fesoasoani e faʻamatalaina a matou faʻasologa o faʻaaliga o kenera eseese na matauina. i la tatou kenera.su'esu'ega manu fa'atasi ai ma le fua o le aveta'avale o le 3.4 .
O le faʻamoemoe o lenei suʻesuʻega o le faʻaaogaina lea o le PB-PCXI synchrotron e vaʻavaʻai ai i le vivo gaioiga o se faasologa o MP i le ala o iole ola.O nei suʻesuʻega faʻataʻitaʻiga PB-PCXI na mamanuina e faʻataʻitaʻi ai le faʻasologa o le MP, le malosi o le mageta, ma le nofoaga e fuafua ai lo latou aafiaga i le gaioiga MP.Na matou manatu o le a fesoasoani le maneta i fafo i le MF tu'uina atu e nofo pe alu i le nofoaga fa'atatau.O nei su'esu'ega na fa'ataga ai fo'i matou e fa'amautu fa'asologa maneta e fa'ateleina ai le aofa'i o vaega o lo'o totoe i totonu o le trachea pe a mae'a fa'aputu.I se faʻasologa lona lua o suʻesuʻega, matou te faʻamoemoe e faʻaoga lenei faʻatulagaga sili ona lelei e faʻaalia ai le faʻasologa o suiga e mafua mai i le tuʻuina atu i vivo o LV-MPs i luga o le ea, i luga o le manatu o le tuʻuina atu o LV-MPs i le tulaga o le faʻaogaina o le ea o le a maua ai. i le faʻateleina o le LV transduction lelei..
O suʻesuʻega uma a manu na faʻatautaia e tusa ai ma tulafono faʻamaonia e le Iunivesite o Adelaide (M-2019-060 ma M-2020-022) ma le SPring-8 Synchrotron Animal Ethics Committee.O faʻataʻitaʻiga na faia e tusa ai ma fautuaga a le ARRIVE.
O ata uma o le x-ray na puʻeina i le BL20XU beamline i le SPring-8 synchrotron i Iapani e faʻaaoga ai se seti tutusa ma le faʻamatalaina muamua21,22.I se faapuupuuga, o le pusa faʻataʻitaʻi sa tu i le 245 mita mai le mama faʻapipiʻi synchrotron.Ole mamao ole fa'ata'ita'i ile su'esu'ega ole 0.6m e fa'aoga mo su'esu'ega fa'ata'ita'i ma le 0.3m mo su'esu'ega fa'ata i vivo e fa'atupu ai a'afiaga fa'atusatusa vaega.Sa fa'aaogaina se la'au monochromatic ma le malosi o le 25 keV.O ata na maua i le fa'aaogaina o se fa'aliliuga X-ray maualuga (SPring-8 BM3) fa'atasi ma se su'esu'ega sCMOS.E fa'aliliuina e le transducer ia X-ray i le malamalama va'aia e fa'aaoga ai le 10 µm mafiafia scintillator (Gd3Al2Ga3O12), ona fa'atonu atu lea i le sCMOS sensor e fa'aaoga ai le x10 (NA 0.3) fa'amoemoega microscope.O le sCMOS detector o se Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics, Iapani) faʻatasi ai ma le lapopoa o le 2048 × 2048 pixels ma le lapoʻa mata o le 6.5 × 6.5 µm.O lenei fa'atulagaga e maua ai le tele o le pika isotropic lelei o le 0.51 µm ma le va'aiga e tusa ma le 1.1 mm × 1.1 mm.Ole umi ole fa'aalia ole 100 ms na filifilia e fa'asilisili ai le fua fa'ailo-i-piso ole vaega fa'amaneta i totonu ma fafo atu o le ea a'o fa'aitiitia mea gaioi e mafua mai ile manava.Mo su'esu'ega i vivo, na tu'u ai se tapuni fa'asao X-ray i le ala X-ray e fa'atapula'a ai le fua fa'avevela e ala i le polokaina o le la'au X-ray i le va o fa'aaliga.
LV media e le'i fa'aogaina i so'o se su'esu'ega fa'ata'ita'iga a le SPring-8 PB-PCXI ona o le potu fa'ata'ita'i BL20XU e le'o fa'amaonia le Biosafety Level 2.Nai lo lena, na matou filifilia le tele o MPs faʻamaonia lelei mai faʻatau pisinisi e lua e aofia ai le tele o lapopoa, meafaitino, faʻamaualuga uʻamea, ma faʻaoga , - muamua ina ia malamalama pe faʻafefea ona aʻafia e le maneta le gaioiga o MP i capillaries tioata, ona sosoo ai lea ma i totonu. alaea ola.luga.O le tele o le MP e eseese mai le 0.25 i le 18 µm ma e faia mai mea eseese (silasila i le Laulau 1), ae o le tuufaatasiga o faʻataʻitaʻiga taʻitasi, e aofia ai le tele o vaega maneta i totonu o le MP, e le o iloa.Fa'avae a matou su'esu'ega MCT tele 19, 20, 21, 23, 24, matou te fa'amoemoe e mafai ona va'aia MP i lalo i le 5 µm i luga o le ea fa'alava, mo se fa'ata'ita'iga, e ala i le to'ese o fa'avaa sosoo e va'aia ai le fa'aleleia atili o le va'aiga a le MP.O se MP e tasi o le 0.25 µm e laʻititi nai lo le iuga o le masini faʻataʻitaʻiga, ae o le PB-PCXI e faʻamoemoe e iloa le eseesega o le volumetric ma le gaioiga o le vai i luga o le mea e teu ai pe a uma ona teuina.
Fa'ata'ita'iga mo MP ta'itasi ile laulau.1 na saunia i le 20 μl capillaries tioata (Drummond Microcaps, PA, ISA) faʻatasi ai ma le lautele totonu ole 0.63 mm.O vaega o le tino o lo'o maua i totonu o le vai, a'o le CombiMag particles o lo'o maua i totonu o le fale gaosi oloa.O paipa ta'itasi e fa'atumuina le afa i le vai (pe tusa ma le 11 µl) ma tu'u i luga o le fa'amau fa'ata'ita'iga (silasila i le Ata 1).O capillaries tioata na tuʻu faʻalava i luga o le tulaga i totonu o le potu faʻataʻitaʻiga, i le faasologa, ma faʻatulagaina i pito o le vai.O se maneta atigi nikeli e 19 mm le lautele (28 mm le umi) e faia i le eleele seasea, neodymium, u'amea ma boron (NdFeB) (N35, pusi nu. LM1652, Jaycar Electronics, Ausetalia) faatasi ai ma le tumau o le 1.17 T sa faapipii i se laulau fesiitaiga eseese e ausia Remotely sui lou tulaga i le taimi o le tuuina atu.E amata le fa'ata'ita'iga o le X-ray pe a tu'u le maneta pe a ma le 30 mm i luga a'e o le fa'ata'ita'iga ma maua ata ile 4 fa'avaa ile sekone.I le taimi o faʻataʻitaʻiga, na faʻalatalata le maneta i le ipu tioata tioata (i le mamao e tusa ma le 1 mm) ona faʻasolo lea i luga o le paipa e iloilo ai le aʻafiaga o le malosi ma le tulaga.
Se seti ata in vitro o loʻo i ai faʻataʻitaʻiga MP i capillaries tioata i le tulaga o le faʻaliliuga o le xy sample.O le ala o le ave X-ray ua faailogaina i se laina togitogi mumu.
O le taimi lava na faʻamautu ai le vaʻaia i vitro o MPs, o se vaega o latou na faʻataʻitaʻiina i vivo i luga o tamaʻitaʻi Wistar albino rats (~ 12 vaiaso le matua, ~ 200 g).Medetomidine 0.24 mg / kg (Domitor®, Zenoaq, Iapani), midazolam 3.2 mg / kg (Dormicum®, Astellas Pharma, Iapani) ma le butorphanol 4 mg / kg (Vetorphale®, Meiji Seika).Na fa'ama'i iole i le paluga Pharma (Iapani) e ala ile tui ile intraperitoneal.A maeʻa faʻamaʻi faʻamaʻi, na saunia mo le faʻataʻitaʻiga e ala i le aveeseina o le fulufulu o loʻo siomia ai le trachea, faʻapipiʻi le endotracheal tube (ET; 16 Ga intravenous cannula, Terumo BCT), ma le faʻaogaina i latou i luga o se tulaga faʻapipiʻi i luga o se ipu faʻataʻitaʻiga masani o loʻo i ai se ato vevela. ia faatumauina le vevela o le tino.22. Ona faʻapipiʻi lea o le ipu faʻataʻitaʻiga i le faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga i totonu o le pusa faʻataʻitaʻiga i se laʻititi laʻititi e faʻaogaina ai le alalaupapa faʻalava i luga o le ata x-ray e pei ona faʻaalia i le Ata 2a.
(a) In vivo fa'ata'ita'iga seti i le SPring-8 imaging unit, X-ray ala fa'ailoga ua fa'ailogaina i laina togitogi mumu.(b,c) O le fa'aogaina o le maneta o le tracheal sa fa'atino mamao e fa'aaoga ai kamela IP e lua fa'apipi'i fa'asolosolo.I le itu tauagavale o le ata i luga o le lau, e mafai ona e vaʻai i le uaea matasele o loʻo uuina le ulu ma le tuʻuina atu o le cannula faʻapipiʻi i totonu o le ET tube.
O se masini pamu tui (UMP2, World Precision Instruments, Sarasota, FL) e faʻaaoga ai le 100 µl glass syringe sa fesoʻotaʻi i se paipa PE10 (0.61 mm OD, 0.28 mm ID) e faʻaaoga ai le nila 30 Ga.Faailoga le paipa ina ia mautinoa o loʻo i ai le pito i le tulaga saʻo i totonu o le trachea pe a faʻapipiʻi le faʻauʻu endotracheal.I le fa'aogaina o le pamu micro, na aveese ai le tui tui ma fa'atofuina le pito o le fa'agaau i le fa'ata'ita'iga MP e tu'uina atu.Ona fa'aofi lea o le fa'amomoli fa'amomoli fa'atumuina i totonu o le fa'au'u fa'au'u, tu'u le pito i le vaega sili ona malosi o le maneta fa'atatau.O le mauaina o ata na pulea e ala i le faʻaogaina o le manava e fesoʻotaʻi ma le matou pusa taimi faʻavae Arduino, ma faʻailoga uma (faʻataʻitaʻiga, vevela, manava, tapuni tatala / tapuni, ma le mauaina o ata) na faʻamauina e faʻaaoga ai le Powerlab ma LabChart (AD Instruments, Sydney, Ausetalia) 22 Pe a Faʻataʻitaʻiga Ina ua le maua le fale, lua IP kamera (Panasonic BB-SC382) sa faʻatulagaina i le tusa ma le 90 ° le tasi ma le isi ma faʻaaoga e pulea ai le tulaga o le maneta e faʻatatau i le trachea i le taimi o ata (Ata 2b, c).Ina ia fa'aiti'itia mea gaioi, e tasi le ata i le mānava na maua i le taimi o le fa'ato'a fa'amama le manava.
O le maneta o loʻo faʻapipiʻi i le vaega lona lua, lea e mafai ona tuʻu mamao i fafo o le tino ata.Na fa'ata'ita'iina tulaga eseese ma fa'atonuga o le maneta, e aofia ai: tu'u i se tulimanu e tusa ma le 30° i luga a'e o le la'au (fa'asologa o lo'o fa'aalia i Ata 2a ma le 3a);le tasi maneta i luga a'e o le manu ma le isi i lalo, faatasi ai ma pou ua seti mo le faatosinaina (Ata 3b)., tasi le maneta i luga a'e o le manu ma le tasi i lalo, faatasi ai ma pou ua seti mo le teenaina (Ata 3c), ma le tasi maneta i luga ma sa'o i le ala'au (Ata 3d).A mae'a ona fa'atutuina le manu ma le maneta ma fa'apipi'i le MP i lalo o le su'ega i totonu o le pamu tui, tu'u le fua ole 50 µl ile fua ole 4 µl/sec i le mauaina o ata.Ona fa'asolo lea o le maneta i tua ma luma i luga po'o le isi itu o le trachea a'o fa'aauau pea ona maua ata.
Fa'atonuga maneta mo ata i vivo (a) tasi le maneta i luga a'e o le trachea i se tulimanu pe a ma le 30°, (b) lua maneta ua fa'atulagaina mo le tosina mai, (c) lua maneta ua fa'atulagaina mo le fa'ate'aina, (d) tasi maneta i luga ma fa'asaga i le maneta. alatoto.Na tilotilo ifo le tagata matau mai le gutu i le mama e ala i le trachea ma o le X-ray beam na ui atu i le itu agavale o le isumu ma alu ese mai le itu taumatau.O le maneta o lo'o fa'agaoioi i luga o le umi o le ea po'o le agavale ma le sa'o i luga a'e o le trachea i le itu o le X-ray beam.
Sa matou saili foi e fuafua le vaʻaia ma le amio o vaega i luga o le ea i le leai o se faʻafefiloi o le manava ma le fatu.O le mea lea, i le faaiuga o le taimi faʻataʻitaʻiga, o manu na faʻaleagaina faʻaletagata ona o le pentobarbital overdose (Somnopentyl, Pitman-Moore, Washington Crossing, ISA; ~ 65 mg / kg ip).O nisi o manu na tu'u i luga o le fa'ailoga ata, ma ina ua uma le manava ma le tata o le fatu, sa toe faia le fa'ata'ita'iga, fa'aopoopo le fa'aopoopo o le MP pe a leai se MP na iloa i luga o le ea.
O ata na maua na faʻasaʻo mo le fanua mafolafola ma le pogisa ona faʻapipiʻi lea i se ata tifaga (20 faʻavaa i le sekone; 15-25 × masani le saoasaoa e faʻatatau i le manava) e faʻaaoga ai se tusitusiga masani na tusia i le MATLAB (R2020a, The Mathworks).
O suʻesuʻega uma i luga o le LV gene vector delivery na faia i le Iunivesite o Adelaide Laboratory Animal Research Center ma faʻamoemoe e faʻaoga iʻuga o le SPring-8 faʻataʻitaʻiga e iloilo ai pe mafai e le tuʻuina atu o le LV-MP i le i ai o se maneta ona faʻaleleia le faʻaliliuina o gene i vivo .Ina ia iloilo aʻafiaga o le MF ma le mageta, e lua vaega o manu na togafitia: tasi le vaega na tui i le LV MF faʻatasi ai ma le faʻaogaina o le maneta, ma le isi vaega na tui i se vaega e pulea ma le LV MF e aunoa ma le maneta.
LV gene vectors ua gaosia e faʻaaoga ai metotia na faʻamatalaina muamua 25, 26.O le Vector LacZ o lo'o fa'aalia ai se ga'o beta-galactosidase faaniukilia fa'apitonu'u o lo'o fa'aosoina e le MPSV constitutive promoter (LV-LacZ), lea e maua mai ai se mea fa'afoliga lanumoana i sela fa'aliliuina, e va'aia i luma ma vaega o le tino mama.Na faia le titration i aganuʻu sela e ala i le faitauina ma le lima o le numera o le LacZ-positive sela e faʻaaoga ai le hemocytometer e fuafua ai le titer i TU / ml.O lo'o fa'asaoina pusa i le -80°C, fa'asusu a'o le'i fa'aogaina, ma fa'amau i le CombiMag e ala i le fa'afefiloi o le 1:1 ma fa'asusu i luga o le aisa mo le itiiti ifo i le 30 minute a'o le'i tu'uina atu.
Normal Sprague Dawley rats (n = 3 / vaega, ~ 2-3 faʻamaʻi ip ma se faʻafefiloi o 0.4mg / kg medetomidine (Domitor, Ilium, Ausetalia) ma le 60mg / kg ketamine (Ilium, Ausetalia) i le 1 masina o le matua) ip ) tui ma le tui gutu e le o se taotoga faʻatasi ma le 16 Ga intravenous cannula.Ina ia mautinoa o loʻo maua le faʻaogaina o le LV transduction, na faʻapipiʻiina i le faʻaaogaina o la matou faʻamatalaga faʻapitoa faʻainisinia lea na faʻapipiʻiina ai le ala o le alalaupapa i se ato uaea (N-Circle, nitinol stone extractor e aunoa ma se pito NTSE-022115) -UDH, Cook Fomai, ISA) 30 p28.Ma, pe a ma le 10 minute talu ona maeʻa le faʻalavelave i totonu o le biosafety cabinet, na faia ai le faʻaogaina o le tracheal o le LV-MP.
O le maneta o lo'o fa'aaogaina i lenei fa'ata'ita'iga na fa'atusaina i se su'esu'ega i vivo x-ray, fa'atasi ai ma maneta o lo'o taofia i luga o le alalaupapa fa'atasi ai ma fa'amau fa'amama (Ata 4).O le 50 µl voluma (2 x 25 µl aliquots) o le LV-MP na tu'uina atu i le trachea (n = 3 manu) e fa'aaoga ai se paipa gel-tipped e pei ona faamatalaina muamua.O le vaega e pulea (n = 3 manu) na maua le LV-MP tutusa e aunoa ma le faʻaogaina o se maneta.A maeʻa le faʻamaʻi, e aveese le cannula mai le faʻauʻu endotracheal ma faʻamaʻi le manu.E tumau pea le maneta mo le 10 minute a'o le'i aveese.O isumu na faʻaulu i lalo o le paʻu i le meloxicam (1 ml / kg) (Ilium, Ausetalia) sosoo ai ma le faʻamaʻi faʻamaʻi e ala i le tui intraperitoneal o le 1 mg / kg atipamazole hydrochloride (Antisedan, Zoetis, Ausetalia).Sa fa'amafanafanaina iole ma mata'ituina se'ia toe malosi atoatoa mai fa'ama'i.
LV-MP tu'uina atu masini i totonu o se kapoti saogalemu olaola.E mafai ona e va'aia o lo'o alu a'e mai le gutu le lima lanu efuefu Luer-lock o le paipa ET, ma o le pito o le paipa gel o lo'o fa'aalia i le ata o lo'o fa'aofiina i totonu o le ET tube i le loloto e mana'omia i totonu o le trachea.
E tasi le vaiaso talu ona maeʻa le faʻataʻitaʻiga o le LV-MP, na ositaulagaina ai manu e ala i le inhalation o le 100% CO2 ma le faʻamatalaga LacZ na suʻesuʻeina e faʻaaoga ai a matou togafitiga masani X-gal.O mama cartilage e tolu pito sili ona maualuga na aveese ina ia mautinoa o soʻo se faʻaleagaina faʻainisinia poʻo le taofiofia o le suavai ona o le tuʻuina o le paipa endotracheal o le a le aofia i le suʻesuʻega.Sa tipi fa'ava'a ta'itasi ta'itasi e maua ai ni afa se lua mo le su'esu'ega ma tu'u i totonu o se ipu o lo'o i ai le pa'u silikoni (Sylgard, Dow Inc) e fa'aoga ai le nila Minutien (Fine Science Tools) e va'aia ai le mata o le malamalama.O le tufatufaina atu ma le uiga o sela faʻaliliuina na faʻamaonia e ala i ata pito i luma e faʻaaoga ai le Nikon microscope (SMZ1500) faʻatasi ai ma le DigiLite kamera ma le TCapture software (Tucsen Photonics, Saina).O ata na maua i le 20x faʻalautele (e aofia ai le faʻatulagaina maualuga mo le lautele atoa o le trachea), faʻatasi ai ma le umi atoa o le trachea o loʻo faʻaalia i lea laasaga ma lea laasaga, ia lava le faʻaogaina i le va o ata taʻitasi e mafai ai ona "suʻi" ata.Ona tu'ufa'atasia lea o ata mai ta'otoga ta'itasi i se ata tu'ufa'atasi e tasi e fa'aaoga ai le Fa'atonu Ata Fa'atonu version 2.0.3 (Microsoft Research) e fa'aaoga ai le planar motion algorithm. Ole vaega ole fa'amatalaga LacZ i totonu ole la'au fa'atusa fa'atusa mai manu ta'itasi na fa'atatauina ile fa'aogaina ole MATLAB fa'autometi (R2020a, MathWorks) e pei ona fa'amatalaina muamua28, fa'aaoga tulaga o le 0.35 <Hue <0.58, Saturation> 0.15, ma le Taua <0.7. Ole vaega ole fa'amatalaga LacZ i totonu ole la'au fa'atusa ata mai manu ta'itasi na fa'atatauina ile fa'aogaina ole MATLAB fa'autometi (R2020a, MathWorks) e pei ona fa'amatalaina muamua28, fa'aaoga tulaga o le 0.35 <Hue <0.58, Saturation> 0.15, ma le Taua <0.7. Площадь экспрессии LacZ в составных изображениях трахеи от каждого животного была количественно определена с использованием автоматизированного сценария MATLAB (R2020a, MathWorks), как описано ранее28, с использованием настроек 0,35 <оттенок <0,58, насыщенность> 0,15 и значение <0 ,7. Ole vaega ole fa'amatalaga LacZ ile fa'aputuga o ata mai manu ta'itasi na fa'atatau ile fa'aogaina ole MATLAB fa'autometi (R2020a, MathWorks) e pei ona fa'amatalaina muamua28 fa'aaoga tulaga o le 0.35.0.15 ma le tau <0.7.如前所述，使用自动MATLAB 脚本（R2020a，MathWorks）对来自每只动物的气管复合图像中的LacZ 表达区域进行量化，使用0.35 < 色调< 0.58、饱和度> 0.15 和值< 0.7 的设置。如 如 述 述, 述 述 述 自动 Malab 脚本 ((R202, Mathworks) 来自 来自 只 复合 使用 使用 使用 使用 使用 使用 使用: - ...................... Области экспрессии LacZ на составных изображениях трахеи каждого животного количественно определяли с использованием автоматизированного сценария MATLAB (R2020a, MathWorks), как описано ранее, с использованием настроек 0,35 <оттенок <0,58, насыщенность> 0,15 и значение <0,7 . O vaega o le LacZ faʻamatalaga i luga o ata tuʻufaʻatasia o le trachea o manu taʻitasi na faʻatatauina i le faʻaogaina o le MATLAB faʻapitoa (R2020a, MathWorks) e pei ona faʻamatalaina muamua i le faʻaogaina o le 0.35 < hue <0.58, saturation> 0.15 ma le tau <0.7.E ala i le su'esu'eina o fa'asologa o mea i totonu o le GIMP v2.10.24, na faia ai ma le lima se matapulepule mo ata tu'ufa'atasi ta'itasi e iloa ai le vaega o le tino ma puipuia ai so'o se fa'amatalaga sese i fafo atu o le aano o le tracheal.O vaega pisipisia mai ata tu'ufa'atasi uma mai manu ta'itasi na fa'aputuina e maua ai le aofa'iga o vaega pisia mo lea manu.Ona vaevaeina lea o le vaega vali i le vaega atoa o le mask e maua ai se vaega masani.
O la'au ta'itasi sa fa'apipi'i i totonu o le paraffini ma va'ava'ai 5 µm mafiafia.O vaega sa fa'afeagai ma le mumu vave mumu mo le 5 minute ma ata na maua e fa'aaoga ai le Nikon Eclipse E400 microscope, DS-Fi3 mea pueata ma le NIS element capture software (version 5.20.00).
O su'esu'ega fa'afuainumera uma na fa'atino i le GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.).Fa'amaumauga taua na fa'atulaga ile p ≤ 0.05.Na faʻataʻitaʻiina le masani e faʻaaoga ai le suʻega a Shapiro-Wilk ma le eseesega i le faʻaogaina o le LacZ na suʻesuʻeina e faʻaaoga ai se suʻega t e leʻi faʻaluaina.
O MP e ono o loʻo faʻamatalaina i le Laulau 1 na suʻesuʻeina e le PCXI, ma o loʻo faʻamatalaina le vaʻaia i le Laulau 2. E lua MP1 polystyrene (MP1 ma MP2; 18 µm ma 0.25 µm, i le faasologa) e leʻi iloa e PCXI, ae o isi faʻataʻitaʻiga e mafai ona iloa. (o faʻataʻitaʻiga o loʻo faʻaalia i le Ata 5).MP3 ma MP4 e vaivai le va'aia (10-15% Fe3O4; 0.25 µm ma le 0.9 µm, fa'asologa).E ui lava o le MP5 (98% Fe3O4; 0.25 µm) o loʻo i ai nisi o vaega laiti na faʻataʻitaʻiina, e sili ona taʻutaʻua.O le oloa CombiMag MP6 e faigata ona iloa.I tulaga uma, o lo matou mafaia ona iloa MFs na matua faʻaleleia e ala i le faʻanofoina o le maneta i tua ma luma e tutusa ma le capillary.A o alu ese ia maneta mai le capillary, na toso ese mai vaega ninii i filifili uumi, ae a o latalata atu maneta ma faateleina le malosi o le maneta, na faapuupuu filifili fasimea ao agai atu ia vaega i luga o le pito i luga o le capillary (silasila i le Vitio Faaopoopo S1. : MP4), fa'atuputeleina le mafiafia o fasimea i luga.I le isi itu, pe a aveese le maneta mai le capillary, e faʻaitiitia le malosi o le fanua ma toe faʻatulagaina e MP i filifili uumi e faʻalautele mai le pito i luga o le capillary (silasila i le Vitio Faaopoopo S2: MP4).A uma ona taofi le gaioi o le maneta, e fa'aauau pea ona fealua'i ia vaega mo sina taimi pe a uma ona o'o i le tulaga paleni.A'o aga'i atu le MP ma alu ese mai le pito i luga o le capillary, o vaega maneta e masani ona toso mai otaota i totonu o le vai.
Ole va'aiga ole MP i lalo ole PCXI e matua'i eseese lava ile va fa'ata'ita'iga.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 ma le (d) MP6.O ata uma o lo'o fa'aalia iinei na pu'eina i se maneta o lo'o fa'atulagaina pe tusa ma le 10 mm i luga a'e sa'o o le capillary.O li'o tetele e aliali mai o ni ea o lo'o pu'eina i capillaries, o lo'o fa'aalia manino ai foliga uliuli ma le pa'epa'e pito o le va'aiga fa'atusatusa ata.O le pusa mumu e faʻaalia ai le faʻalauteleina e faʻaleleia ai le faʻatusatusaga.Manatua o le lautele o le maneta taamilo i fuainumera uma e le faʻatusatusa ma e tusa ma le 100 taimi sili atu nai lo le faʻaalia.
A'o alu le maneta i le agavale ma le taumatau i luga o le pito i luga o le capillary, o le tulimanu o le manoa MP e sui e fetaui ma le maneta (silasila i le Ata 6), ma fa'apea ona fa'ailoa ai laina o le maneta.Mo le MP3-5, a maeʻa ona oʻo atu le chord i le pito o le faitotoʻa, e toso le vaega i luga o le pito i luga o le capillary.E masani ona fa'atupuina le fa'aputuina o MP i vaega tetele e lata ane i le mea e sili ona malosi ai le maneta (silasila i le Vitio Faaopoopo S3: MP5).E faʻapitoa foʻi le faʻamaonia pe a faʻataʻitaʻi latalata i le pito o le capillary, lea e mafua ai ona faʻapipiʻi le MP ma faʻapipiʻi i le faʻaogaina o le vai-ea.O vaega i totonu o le MP6, lea sa faigata ona iloa le eseesega nai lo i latou i le MP3-5, e leʻi tosoina pe a gaoioi le maneta i luga o le capillary, ae o le MP ua vavae ese, ma tuʻu ai vaega o loʻo vaʻaia (silasila i le Vitio Faaopoopo S4: MP6).I nisi tulaga, pe a faʻaitiitia le faʻaogaina o le maneta e ala i le faʻanofoina o le maneta i se mamao mamao mai le nofoaga o ata, o soʻo se MP o totoe na alu ifo lemu i le pito i lalo o le paipa e ala i le kalave, ma tumau i totonu o le manoa (silasila i le Vitio Faaopoopo S5: MP3). .
O le tulimanu o le manoa MP e sui a'o alu le maneta i le taumatau i luga a'e o le capillary.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 ma le (d) MP6.O le pusa mumu e faʻaalia ai le faʻalauteleina e faʻaleleia ai le faʻatusatusaga.Fa'amolemole maitau o vitio fa'aopoopo e mo fa'amatalaga fa'amatalaga a'o latou fa'aalia le fa'atulagaina o vaega taua ma fa'amatalaga fa'amalosi e le mafai ona va'aia i nei ata fa'atusa.
O a matou suʻega ua faʻaalia ai o le faʻaosoina lemu o le maneta i luma ma luma i luga o le trachea e faʻafaigofie ai le vaʻaia o le MF i le tulaga o le gaioiga faigata i vivo.Leai ni su'ega in vivo na faia ona e le o iloa atu le pulu polystyrene (MP1 ma le MP2) i le capillary.O MF uma e fa na totoe na faʻataʻitaʻiina i vivo ma le umi umi o le maneta o loʻo tuʻu i luga o le alalaupapa i se tulimanu e tusa ma le 30 ° i luga o le saʻo (silasila i le Ata 2b ma le 3a), ona o lea na iʻu ai i filifili MF uumi ma sili atu ona aoga. nai lo se maneta..fa'amuta le fa'atulagaga.O le MP3, MP4 ma le MP6 e leʻi maua i totonu o le ala o soʻo se manu ola.Pe a vaai faalemafaufau i le manava o isumu ina ua uma ona fasia manu, sa tumau pea le le vaaia o vaega e tusa lava pe faaopoopo le voluma e faaaoga ai se pamu tui.O le MP5 o lo'o i ai le maualuga o le u'amea u'amea ma na'o le pau lea o le vaega o lo'o va'aia, o lea na fa'aaogaina e iloilo ai ma fa'aalia amioga a le MP i vivo.
O le tu'uina o le maneta i luga o le la'au i le taimi o le fa'aofiina o le MF na i'u ai i le tele, ae le o mea uma, o MF ua fa'atumauina i le va'aiga.E sili ona mata'ituina le ulufale atu i totonu ole la'au i manu ua fa'amama fa'aletagata.Ata 7 ma le Vitio Faaopoopo S6: O le MP5 o lo'o fa'aalia ai le vave pu'eina o le maneta ma le fa'aogaina o mea ninii i luga o le ventral trachea, o lo'o fa'ailoa mai ai e mafai ona taula'i sui i vaega e mana'omia o le trachea.Pe a su'esu'e mamao i luga o le trachea ina ua mae'a le tu'uina atu o le MF, o nisi MF na maua latalata i le carina, lea e fa'ailoa mai ai le le lava o le malosi o le mageta e aoina ma taofi uma ai MF, talu ai na tu'uina atu i le itulagi e maualuga le malosi o le maneta i le taimi o le fa'aogaina o le vai.faiga.Peita'i, sa maualuga atu le fa'aputuga o le MP i le va'aiga o le ata, ma fa'ailoa mai ai o le tele o faipule o lo'o tumau pea i vaega o le ea lea e maualuga ai le malosi o le maneta.
Ata o (a) i luma ma le (b) ina ua uma ona tuʻuina atu le MP5 i totonu o le alalaupapa o se isumu na faʻaumatia talu ai nei ma se maneta o loʻo tuʻuina i luga aʻe o le vaega o ata.O le vaega faʻaalia o loʻo i le va o mama cartilaginous e lua.O lo'o iai sina sua i le ea a'o le'i tu'uina atu le MP.O le pusa mumu e faʻaalia ai le faʻalauteleina e faʻaleleia ai le faʻatusatusaga.O ata nei e pu'e mai le vitiō o lo'o fa'aalia i le S6: Vitio Faaopoopo MP5.
O le fa'aosoina o le maneta i luga o le trachea i vivo na i'u ai i se suiga i le tulimanu o le filifili MP i luga o le ea, e tutusa ma le mea na matauina i capillaries (silasila i le Ata 8 ma le Vitio Faaopoopo S7: MP5).Ae ui i lea, i la matou suʻesuʻega, e le mafai e MPs ona toso i luga o luga o le manava o le manava, e pei ona mafai e capillaries.I nisi tulaga, e fa'aumi le filifili MP pe a alu le maneta i le agavale ma le taumatau.O le mea e malie ai, na matou iloa ai foi e suia e le filifili maneta le loloto o le vaega o le vai pe a faʻagaoioi le maneta i luga o le trachea, ma faʻalauteleina pe a faʻagaioi saʻo le maneta i luga o le ulu ma faʻasolo le filifili vaega i se tulaga tūsaʻo (vaai Vitio Faaopoopo S7).: MP5 i le 0:09, pito i lalo taumatau).Na suia le fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'iga pe a fa'agaoioi le maneta i luga o le pito i luga o le alalaupapa (fa'atusa, i le agavale po'o le taumatau o le manu, nai lo le umi o le alalaupapa).Sa manino lava le vaaia lelei o fasimea i le taimi o la latou gaioiga, ae ina ua aveese le maneta mai le trachea, na vaaia le pito o manoa fasimea (tagai i le Vitio Faaopoopo S8: MP5, amata i le 0:08).E ioeina lenei mea ma le amio mata'ituina o le maneta i lalo o le gaioiga a se maneta fa'aogaina i totonu o se tioata tioata.
Faʻataʻitaʻiga ata o loʻo faʻaalia ai le MP5 i totonu o le trachea o se isumu faʻamaʻi ola.(a) E fa'aoga le maneta e maua mai ai ata i luga ma le itu agavale o le trachea, ona (b) pe a uma ona fa'agaoioi le maneta i le itu taumatau.O le pusa mumu e faʻaalia ai le faʻalauteleina e faʻaleleia ai le faʻatusatusaga.O ata nei e mai le vitio o loʻo faʻaalia i le S7's Supplementary Video: MP5.
Ina ua fa'alogoina pou e lua i le itu i matu-saute i luga ma lalo ifo o le alalaupapa (ie, faatosina; Ata 3b), o le MP chords na foliga umi atu ma sa tu i luga o le puipui pito i tua o le alalaupapa ae le o luga o le pito i tua o le alalaupapa. trachea (silasila i le Fa'aopoopoga).Vitio S9:MP5).Peita'i, e le'i iloa atu le maualuga o mea'ai i le tasi nofoaga (fa'atusa, le pito i tua o le trachea) pe a mae'a le fa'aogaina o le vai e fa'aaoga ai se masini maneta lua, lea e masani ona tupu i se masini maneta e tasi.Ma, ina ua faʻatulagaina se tasi maneta e faʻafefe ai pou faʻafeagai (Ata 3c), e leʻi faʻatupulaʻia le aofaʻi o vaega o loʻo vaaia i le fanua o le vaʻaiga pe a uma ona tuʻuina atu.O le fa'atūina o fa'atonuga maneta e lua e lu'itau ona o le maualuga o le malosi o le maneta lea e tosina pe tuleia ai maneta.Ona suia lea o le seti i se maneta se tasi e tutusa ma le ea ae ui atu i luga o le ea i le 90 tikeri maualuga ina ia mafai ai e laina o le malosi ona sopoia le puipui o le alalaupapa (Ata 3d), o se faʻataʻitaʻiga e fuafua e iloa ai le avanoa o le faʻapipiʻiina o vaega i luga. le puipui pito i tua.ia matauina.Ae ui i lea, i lenei faʻatulagaga, e leai se faʻaogaina o le faʻaputuga o le MF poʻo le gaioiga maneta.Faʻavae i luga o nei faʻaiʻuga uma, o se faʻatulagaga ma se maneta e tasi ma se 30-tikeri orientation na filifilia mo in vivo suʻesuʻega o gene carriers (Fig. 3a).
Pe a fa'atusaina le manu i le tele o taimi i le mae'a ai o le ositaulagaina o tagata, o le leai o se gaioiga fa'alavelave fa'alavelave o lona uiga e sili atu ona lelei, laina pu'upu'u e mafai ona iloatino i totonu o le fanua intercartilaginous manino, 'swaying' e tusa ai ma le fa'aliliuga o le maneta.vaʻaia manino le i ai ma le gaioiga o vaega MP6.
O le titer o le LV-LacZ o le 1.8 x 108 IU / mL, ma ina ua uma ona faʻafefiloi 1: 1 ma CombiMag MP (MP6), na tui manu i le 50 µl o le tui o le 9 x 107 IU / ml o le LV taavale (ie 4.5). x 106 TU/iole).)).I nei suʻesuʻega, nai lo le faʻanofoina o le maneta i le taimi o le galuega, matou te faʻapipiʻiina le maneta i se tulaga e tasi e fuafua ai pe mafai ona faʻaleleia le LV transduction (a) faʻatusatusa i le faʻauluina o vete i le leai o se maneta, ma (b) pe a mafai e le ea. ia taula'i.O sela o lo'o fa'aliliuina i vaega fa'amaneta o le pito i luga o le manava.
O le i ai o maneta ma le faʻaogaina o le CombiMag faʻatasi ma LV vectors e foliga mai e leʻi afaina ai le soifua maloloina o manu, e pei o la matou faʻataʻitaʻiga masani LV vector delivery protocol.O ata pito i luma o le vaega o le tracheal o loʻo aʻafia i faʻalavelave faʻainisinia (Faʻaopoopo Ata. 1) na faʻaalia ai o le LV-MP o loʻo togafitia le vaega e sili atu le maualuga o le transduction i le i ai o se maneta (Fig. 9a).Naʻo sina vaega laʻititi o lanu lanumoana LacZ na i ai i le vaega faʻatonutonu (Ata 9b).O le faʻatusatusaina o le X-Gal-stained normalized regions na faʻaalia ai o le puleaina o le LV-MP i le i ai o se maneta na mafua ai le faʻaleleia atili o le 6-fold (Fig. 9c).
Fa'ata'ita'iga o ata tu'ufa'atasi o lo'o fa'aalia ai le fa'aliliuina o le la'au ma le LV-MP (a) i le i ai o se maneta ma (b) i le leai o se maneta.(c) Fa'afuainumera taua fa'aleleia i le vaega masani o le LacZ transduction i le trachea ma le fa'aogaina o se maneta (*p = 0.029, t-su'ega, n = 3 i le vaega, uiga ± sese masani o le uiga).
O vaega faʻafefete vave mumu (faʻataʻitaʻiga o loʻo faʻaalia i le Ata Faʻaopoopo 2) na faʻaalia ai o loʻo i ai i totonu o le faʻataʻitaʻiga tutusa ma le nofoaga e tasi e pei ona lipotia muamua.
O le lu'itau autu i le togafitiga o le ea o lo'o tumau pea le sa'o o le localization o vaega felauaiga i vaega e fiafia i ai ma le ausia o se tulaga maualuga o le transduction lelei i totonu o le mama feaveai i le i ai o le ea ma le mucus kilia malosi.Mo va'a LV fa'amoemoe mo le togafitia o fa'ama'i manava ile cystic fibrosis, o le fa'ateleina o le taimi e nofo ai vaega fe'avea'i i auala fa'a'ave'ave e o'o mai i le taimi nei o se sini e le mafai ona ausia.E pei ona taʻua e Castellani et al., O le faʻaogaina o le mageta e faʻaleleia ai le faʻaliliuga e sili atu le lelei i luga o isi auala faʻapipiʻi gaʻo e pei o le electroporation aua e mafai ona tuʻufaʻatasia le faigofie, tamaoaiga, tuʻuina atu i le lotoifale, faʻateleina le lelei, ma le faʻapuupuu taimi incubation.ma atonu o se fua maualalo o le taavale10.Ae ui i lea, i le vivo deposition ma amioga a vaega mageta i le ea i lalo o le aafiaga o malosiaga mageta i fafo e leʻi faʻamatalaina, ma o le mea moni o le gafatia o lenei metotia e faʻateleina ai le faʻaalia o le faʻaalia o le faʻaogaina o le faʻaogaina o le ea ola e leʻi faʻaalia i vivo.
O a matou suʻesuʻega in vitro i luga o le PCXI synchrotron na faʻaalia ai o vaega uma na matou faʻataʻitaʻiina, seʻi vagana ai le MP polystyrene, na faʻaalia i le seti ata na matou faʻaaogaina.I le i ai o se maneta, o le maneta e fausia ai ni manoa, o le umi e fesoʻotaʻi ma le ituaiga o vaega ma le malosi o le maneta (ie, le vavalalata ma le gaioiga o le maneta).E pei ona fa'aalia i le Ata 10, o manoa tatou te va'aia e fa'atupuina a'o fa'amaneta ta'itasi vaega ta'itasi ma fa'aosoina ai lona lava maneta fa'apitonu'u.O nei fanua eseese e mafua ai ona aoina mai isi vaega tutusa ma fesoʻotaʻi ma gaioiga manoa faʻavae ona o malosiaga faʻapitonuʻu mai malosiaga faʻapitonuʻu o le tosina ma le teenaina o isi vaega.
Ata o lo'o fa'aalia ai le (a, b) filifili o mea ninii o lo'o fa'atupu i totonu o fa'apalapala e tumu i le vai ma (c, d) se ala'au e tumu i le ea.Manatua o capillaries ma trachea e le o tosoina i le fua.O le laulau (a) o lo'o iai fo'i se fa'amatalaga o le MF o lo'o i ai vaega ninii Fe3O4 o lo'o fa'atulaga i filifili.
Ina ua alu le maneta i luga o le capillary, o le tulimanu o le manoa fasimea na oʻo atu i le tulaga taua mo MP3-5 o loʻo i ai Fe3O4, ina ua maeʻa ona le toe tumau le manoa i lona tulaga muamua, ae na siitia i luga o le fogaeleele i se tulaga fou.maneta.Atonu e tupu lenei aafiaga ona e lamolemole le pito i luga ole mata tioata e mafai ai ona tupu lenei gaioiga.O le mea e malie ai, o le MP6 (CombiMag) e leʻi amio faʻapena, masalo ona o vaega laiti e laiti, e ese le faʻapipiʻiina poʻo le faʻaogaina o luga, poʻo le suavai vaʻavaʻa na afaina ai lo latou mafai ona gaoioi.O le faʻatusatusaga i le ata o le CombiMag e vaivai foi, o loʻo fautua mai ai o le vai ma vaega e mafai ona tutusa le mamafa ma o le mea lea e le faigofie ai ona feʻaveaʻi le tasi i le isi.E mafai foi ona pipii fasimea pe afai e vave tele le alu o le maneta, e faailoa mai ai e le mafai e le malosi o le maneta ona faatoilaloina i taimi uma le feteʻenaʻiga i le va o vaega i totonu o le vai, e fautua mai ai e le tatau ona oʻo mai le malosi o le maneta ma le mamao i le va o le maneta ma le vaega o loʻo faʻatatauina. ofo.taua.O fa'ai'uga fo'i nei ua fa'ailoa mai ai e ui lava e mafai e maneta ona pu'eina le tele o microparticles o lo'o tafe atu i totonu o le vaega o lo'o fa'atatau i ai, e foliga mai e le mafai ona fa'alagolago i ai maneta e fa'agaoioi ai maneta CombiMag i luga ole laiga o le trachea.O lea la, na matou fa'ai'u ai e tatau i su'esu'ega i vivo LV MF ona fa'aogaina maneta fa'amau e fa'atatau i vaega fa'apitoa o le ea.
O le taimi lava e tuʻuina atu ai meaʻai i totonu o le tino, e faigata ona iloa i le tulaga o le faʻalavelave faʻafefe o le tino, ae o lo latou mafai ona iloa ua faʻaleleia atili e ala i le faʻanofoina o le maneta i luga o le trachea e "faʻafefe" manoa MP.E ui ina mafai ona fa'ata'ita'i i le taimi tonu, e faigofie ona iloatino le fegasoloa'i o vaega pe a uma ona fasiotia fa'aletagata.O fa'aputuga MP e masani lava ona maualuga i lea nofoaga pe'a tu'u le maneta i luga o le vaega o ata, e ui lava o nisi vaega e masani ona maua i lalo o le trachea.E le pei o suʻesuʻega in vitro, e le mafai ona toso i lalo ni vaega i lalo o le trachea e ala i le gaioiga o se maneta.O lea su'esu'ega e o gatasi ma le auala e masani ai ona fa'agaoioia e le mucus o lo'o ufiufi luga o le ala'au'au ni mea'ai ua manava, fa'amauina i totonu o le mucus ma mulimuli ane fa'amama e ala i le muco-ciliary clearance mechanism.
Matou te manatu o le faʻaaogaina o maneta i luga ma lalo ifo o le trachea mo le tosina (Fig. 3b) e mafai ona maua ai se maneta sili atu le tutusa, nai lo se maneta e maualuga le faʻaogaina i le tasi itu, e ono iʻu ai i se tufatufa tutusa o vaega..Ae ui i lea, o la matou suʻesuʻega muamua e leʻi maua ni faʻamaoniga manino e lagolago ai lenei manatu.E fa'apena fo'i, o le fa'atūina o se pea maneta e fa'ate'a (Fig. 3c) e le'i fa'atupuina ai le tele o mea fa'ato'a fa'ato'a i le vaega o ata.O nei su'esu'ega e lua o lo'o fa'aalia ai e le fa'aleleia atili le fa'atonuga fa'apitonu'u ole fa'asinomaga a le MP, ma e faigata ona fa'alogoina le fa'aogaina o malosiaga fa'amaneta, ma fa'aitiitia ai le fa'atinoga.E fa'apena fo'i, o le fa'atonuina o le maneta i luga ma luga ole la'au (Ata 3d) e le'i fa'aopoopoina ai fo'i le aofa'i o vaega o lo'o totoe i le vaega o ata.O nisi o nei fa'asologa fa'aopoopo e ono le manuia ona e fa'aitiitia ai le malosi fa'amaneta i le sone fa'aputu.O le mea lea, o le seti maneta e tasi i le 30 tikeri (Fig. 3a) ua manatu o le auala sili ona faigofie ma sili ona lelei ile suʻega vivo.
O le suʻesuʻega a le LV-MP na faʻaalia ai pe a tuʻufaʻatasia LV vectors ma CombiMag ma tuʻuina atu ina ua uma ona faʻalavelave faʻaletino i le i ai o se maneta, o le maualuga o le faʻaliliuga na faʻatupulaia tele i le trachea pe a faʻatusatusa i faʻatonuga.Faʻavae i suʻesuʻega faʻataʻitaʻiga synchrotron ma faʻaiʻuga o le LacZ, o le maneta na foliga mai e mafai ona taofia le LV i totonu o le trachea ma faʻaitiitia le numera o vector particles na vave ona ulu i totonu o le mama.O ia fa'aleleia atili e mafai ona o'o atu ai i le fa'aleleia atili a'o fa'aitiitia titers tu'uina atu, fa'aliliuga e le o fa'atatauina, a'afiaga fa'ama'i ma puipuia, ma tau fa'aliliuina.O le mea taua, e tusa ai ma le gaosiga, CombiMag e mafai ona faʻaogaina faʻatasi ma isi auala faʻafeiloaʻi o kenera, e aofia ai isi vailaʻau viral (e pei o le AAV) ma nucleic acids.