Giardia duodenum ose meaola fa'ama'i e mafua ai le giardiasis, ose fa'ama'i o le intestinal e masani lava i tamaiti laiti e iai fa'ailoga ile manava.Ua matou lipotia muamua o le extracellular G. duodenalis e faʻaosoina le faʻagaioiina o le intracellular oligomerization-like receptor 3 (NLRP3) fusifusia nucleotides ma faʻatonutonu tali faʻamaʻi talimalo e ala i le faʻaogaina o le vesicle extracellular (EV).Ae ui i lea, o le molecular patterns of the pathogen-associated duodenococcal EV (GEV) o loʻo aʻafia i lenei faagasologa ma le matafaioi a le NLRP3 inflammasome i giardiasis o loʻo tumau pea ona faʻamalamalamaina.
Recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 ma alpha-7.3 giardins i GEV na fausia, fa'aliliuina i le isumu matua peritoneal macrophages, ma iloa e ala i le fuaina o le mumu mole taula'i caspase-1.O le tulaga fa'aaliga p20 na su'eina..G. duodenalis alpha-2 ma alpha-7.3 giardines na muai iloa e ala i le fuaina o le NLRP3 inflammasome (NLRP3, pro-interleukin-1 beta [IL-1β], pro-caspase-1 ma caspase-1 p20), IL secretion.1β maualuga, apoptotic spotted protein (ASC) oligomerization levels, ma immunofluorescent localization o le NLRP3 ma le ASC.O le matafaioi a le NLRP3 inflammasome i le pathogenicity o le G. duodenalis na suʻesuʻeina lea e faʻaaoga ai isumu lea na poloka ai le NLRP3 activation (NLRP3 poloka poloka) ma suiga pathological i le mamafa o le tino, duodenal parasitic load, ma le duodenal tissue na mataʻituina.E le gata i lea, na matou suʻesuʻeina pe faʻaalia e hiardines alpha-2 ma alpha-7.3 le faʻaogaina o le IL-1β i vivo e ala i le NLRP3 inflammasome ma fuafua ai le matafaioi a nei molelaʻau i le pathogenicity o G. duodenalis i isumu.
Alpha-2 ma alpha-7.3 giardines fa'aosofia le fa'agaoioia o le NLRP3 inflammasome in vitro.O lenei mea na mafua ai le faʻagaoioia o le p20 caspase-1, o le faʻateleina o le faʻaaliga maualuga o le NLRP3, pro-IL-1β, ma le pro-caspase-1 proteins, o se faʻaopoopoga tele o le faʻaogaina o le IL-1β, o le faʻavaeina o nofoaga ASA i le cytoplasm, ma le induction o le ASA oligomerization.NLRP3 fulafula penile leiloa faʻateleina le pathogenicity o G. duodenalis i isumu.O isumu na togafitia ile cysts e ala ile gavage mai NLRP3-blocked mice na faʻaalia ai le faʻateleina o numera o trophozoites ma faʻaleagaina tele i le duodenal villi, faʻaalia e necrotic crypts ma faʻaitiitia ma lala.I vivo faʻataʻitaʻiga ua faʻaalia ai o giardines alpha-2 ma alpha-7.3 e mafai ona faʻaosoina le faʻaogaina o le IL-1β e ala i le NLRP3 inflammasome, ma le tui puipuia ma giardines alpha-2 ma le alpha-7.3 na faʻaitiitia ai le pathogenicity o G. duodenalis i isumu.
Faʻatasi, o taunuʻuga o lenei suʻesuʻega o loʻo fautua mai ai o le giardia alpha-2 ma le alpha-7.3 e mafua ai le faʻatonutonuina o le faʻamaʻi o le NLRP3 talimalo ma faʻaitiitia ai le faʻamaʻi o le G. duodenalis i isumu, o loʻo faʻamoemoeina sini mo le puipuia o le giardiasis.
Giardia duodenum o se extracellular protozoan parasite e ola i totonu o le tootoo laiti ma mafua ai le 280 miliona mataupu o le giardiasis ma le manava i tausaga taʻitasi, aemaise lava i tamaiti laiti i atunuʻu atinaʻe [1].E a'afia tagata i vai inu po'o mea'ai ua pisia ile M. duodenum cysts, ona ulu atu lea ile manava ma alu atu ile sua ole manava.O le Giardia duodenum trophozoites e pipii i le epithelium o le duodenal, e mafua ai le faufau, puaʻi, manava manava, tiga o le manava, ma le paʻu o le mamafa.O tagata ta'ito'atasi e maua i le immunodeficiency ma cystic fibrosis e a'afia i fa'ama'i.E mafai fo'i ona tupu fa'ama'i e ala ile tu'u gutu ma feusuaiga [2].O vailaʻau e pei o le metronidazole, tinidazole, ma le nitazoxanide o togafitiga sili ona lelei mo faʻamaʻi pipisi o le duodenal [3].Ae ui i lea, o nei vailaʻau o le chemotherapy e mafua ai aʻafiaga leaga e pei o le nausea, carcinogenesis, ma le genotoxicity [4].O le mea lea, e manaʻomia ona fausia ni taʻiala sili atu ona lelei e puipuia ai le faʻamaʻi G. duodenalis.
Inflammasomes o se vasega o cytosolic protein complexes o se vaega o le tali atu i le tino, fesoasoani e puipuia mai osofaʻiga faʻamaʻi ma faʻatalanoa tali faʻamaʻi [5].Faatasi ai ma nei inflammasomes, nucleotide-binding oligomerization (NOD) receptor 3 (NLRP3) nucleotide-binding oligomerization (NLRP3) nucleotide-binding-like inflammasome ua suʻesuʻeina tele ona e mafai ona iloa e ala eseese pathogen / faʻaleagaina-fesoʻotaʻi mole / mamanu (PAMP). DAMP), iloa, fa'agaoioia le fa'aogaina o le tino.ma faʻatonutonu le homeostasis intestinal i le tele o faʻamaʻi faʻamaʻi [6,7,8].O lo'o aofia ai le fa'ailoga fa'ata'ita'iga (PRR) NLRP3, o se porotini mata'utia apoptotic adapter (ASC), ma le procaspase-1 po'o le procaspase-11.O le NLRP3 inflammasome e galue o se 'au e tetee atu i osofaʻiga faʻamaʻi, e pei ona matauina i Neospora caninum [9], Paracoccidioides brasiliensis [10], ma Leishmania suʻesuʻega.[11], ae ua lipotia mai foi o le faʻagaioiina o le NLRP3 inflammasome e faʻatapulaʻaina ai le puipuiga o le puipuiga ma faʻateleina ai le alualu i luma o faʻamaʻi, mo se faʻataʻitaʻiga, i anufe [12].Faʻavae i luga oa matou suʻesuʻega talu ai, na matou lipotia ai o le extracellular G. duodenalis e faʻaosoina ai le intracellular activation o le mumū o le NLRP3 ma faʻafeiloaʻi tali inflammatory talimalo e ala i le faʻaogaina o vesicle extracellular (EVs) [13].Ae ui i lea, o le matafaioi a le NLRP3 inflammasome i le G. duodenalis faʻamaʻi i vivo o loʻo tumau pea ona fuafuaina.
Giardins na faʻamatalaina muamua o vaega faʻavae o le G. duodenalis cytoskeleton ma faia se sao taua i le trophozoite motility ma le epithelial cell attachment i totonu o le tootoo laiti.Ina ia sili atu ona fetuunai i le siosiomaga ma faateleina lo latou pathogenicity, G. duodenalis trophozoites fausia se fausaga cytoskeletal tulaga ese e aofia ai le 8 flagella, 1 ogatotonu tino, ma le 1 ventral disc [14].O trophozoites o Giardia duodenum e faʻaaogaina a latou cytoskeleton e ulu i luga o le tootoo laiti, aemaise lava le duodenum, ma faʻapipiʻi i enterocytes.Latou te faimalaga pea ma faʻapipiʻi i sela epithelial e faʻaaoga ai le metabolism cell.O le mea lea, o loʻo i ai se vavalalata vavalalata i le va o latou cytoskeleton ma le virulence.Giardines faʻapitoa mo Giardia duodenum o vaega ia o le cytoskeleton structure [15] ma vaevaeina i vasega e fa: α-, β-, γ-, ma δ-giardines.E 21 tagata o le aiga α-giardin, o loʻo i ai uma le malosi faʻalagolago i le calcium e fusifusia ai phospholipids [16].Latou te faʻafesoʻotaʻi foi le cytoskeleton i le membrane cell.I tagata taʻitoʻatasi e maua i le manava e mafua mai i le G. duodenalis, α-giardins e faʻaalia maualuga ma faʻamaʻi i le taimi o faʻamaʻi [17].Vaccine Heterologous e fa'avae ile Giardia alfa-1 puipuia mai le giardiasis i isumu ma e ono mafai ona sui fa'aantigens mo le atina'eina o tui [18].Alpha-8 giardin, faʻapipiʻiina i totonu o le plasma membrane ma le flagella, ae le o le ventral disc, faʻaleleia le gaogao ma le tuputupu aʻe o trophozoites i G. duodenalis [19].O le Alpha-14 giardin e faʻapipiʻi i fausaga microtubule i luga o le fuʻa ma aʻafia ai le gafatia o G. duodenalis [20].Alpha-11 giardine o loʻo i ai i le tele o le taamilosaga o le olaga, ma o le faʻaalia o le alpha-11 giardine e faʻaleagaina ai G. duodenalis lava [21].Ae ui i lea, e le o manino pe o le alpha-2 giardine ma le alpha-7.3 giardine o loʻo puipuia mai le G. duodenalis faʻamaʻi ma o latou faiga faʻavae.
I lenei suʻesuʻega, recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ma pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine sa transfected i isumu matua peritoneal macrophages e faʻagaoioia le talimalo NLRP3.Ona su'esu'e lea o sini fa'amumu.Na matou iloiloina foi le matafaioi a le NLRP3 inflammasome i le pathogenicity o G. duodenalis, suʻesuʻeina pe o le alpha-2 ma le alpha-7,3 giardines e faʻaosofia ai le faʻagaioiina o le NLRP3 inflammasome i vivo, ma faʻamoemoe o nei matafaioi e lua o giardines i le pathogenicity o G. duodenalis.O la matou sini masani o le atinaʻeina o sini faʻamoemoe mo le puipuia o le G. duodenalis faʻamaʻi.
Le ituaiga vao (WT) C57BL/6 tama'ita'i isumu matutua 5-8 vaiaso na fa'atau mai Liaoning Changsheng Experimental Animal Center (Liaoning, Saina).E maua fua e isumu le vai, maua mea'ai fa'ama'i ma teu i totonu ole 12/12 itula malamalama/pouliuli.Aʻo leʻi faʻamaʻi, na maua e isumu ni vailaau faʻamaʻi ad libitum i vai inu faʻaopoopo i le ampicillin (1 mg / mL), vancomycin (1 mg / mL), ma le neomycin (1.4 mg / mL) (na faʻatau uma mai Shanghai, Saina, meaola faʻapitoa) [22 ].].O isumu na leiloa le malosi e 'ai ma inu mo le> 24 itula ma leiloa ≥ 20% le mamafa o le tino na fa'amama fa'aletagata ona o le fa'amama o le tino.
WB G. duodenalis trophozoites (American Type Culture Collection, Manassas, ISA) na faaopoopo i le 12.5% ​​​​fetal bovine serum (FBS; Every Green, Zhejiang, Saina) ma le 0.1% bovine bile (Sigma-Aldrich, St. Missouri, ISA ).USA) i lalo o tulaga microaerobic.O trophozoites fefiloi sa aoina i luga o le aisa ma pasi i le fua faatatau o le 1:4 mo le toe gaosia atili.
Giardia duodenum cysts na faʻaosoina e pei ona faʻamatalaina muamua [23], trophozoites na seleseleina i le logarithmic vaega ona faʻafefeteina lea i le encapsulation inducing medium, pH 7.1 (faʻafouina TYI-S-33) i se faʻasalaga mulimuli o le 1 × 106 trophozoites / mL.fa'atosinaga ole ga'o 0.05% vaeluaga).Trophozoites na fa'atupuina i lalo ole tulaga anaerobic ile 37°C se'ia o'o ile vaega ole tuputupu a'e logarithmic.Suia le ala i le cyst inducing medium (pH 7.8; suia TYI-S-33 medium ma le 1% bile concentration) ma le aganuu G. duodenalis i le 37 ° C mo le 48-96 itula, i le taimi na matauina ai le faʻavaeina o cysts i lalo ole microscope.Ina ua mae'a ona fa'aoso le tele o trophozoites e fai ai ni kesi, ona seleseleina lea o le fa'afefiloi fa'aleaganu'u ma toe tu'u ile vai fa'a'ona fa'amama e fa'amama ai le trophozoites o totoe.Sa faitaulia ma teu i le 4°C mo su'esu'ega mulimuli ane e ala i se fa'amama gastric i isumu.
Giardia extracellular vesicles (GEVs) na faʻatamaoaigaina e pei ona faʻamatalaina muamua [13].Trophozoites i le vaega o le tuputupu aʻe logarithmic na toe faʻanofoina i le faʻaogaina o le TYI-S-33 auala na saunia faʻatasi ma le FBS (Biological Industries, Beit-Haemek, Israel) i se faʻasalaga mulimuli o le 1 × 106 parasites / mL ma faʻafefe mo le 12 itula.na vavae ese mai le aganuu supernatant e ala ile centrifugation ile 2000 g mo le 10 min, 10,000 g mo le 45 min, ma le 100,000 g mo le 60 min.Na fa'amavaeina i le phosphate buffered saline (PBS), fa'atatau i le fa'aaogaina o le BCA protein assay kit (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ISA) ma teu i le -80° C. pe fa'aoga sa'o mo nisi su'esu'ega.
Na saunia macrophages peritoneal kiore Primary e pei ona faamatalaina muamua [24].I se faapuupuuga, o isumu (tausaga 6-8 vaiaso) na tui (intraperitoneally [ip]) ma le 2.5 ml o le 2.98% Difco liquid thioglycol medium (BD, Franklin Lakes, NJ, USA) ma fafaga 3-4 palates.O se taofiga o macrophages na aoina mai le manava manava o isumu ina ua uma le euthanasia ma centrifuged 3 taimi i le 1000 g mo le 10 min.O sela ua seleseleina na iloa e ala i le tafe cytometry e faʻaaoga ai le CD11b faʻailoga seʻia oʻo i le mama o le sela e sili atu i le 98%, ona faʻaopoopoina lea i le 6-well cell culture plates (4.5 x 106 cell/well) ma faʻafefe i le 10% FBS (Bioidustry) ile 37°C.ma le 5% CO2.
Na maua mai le RNA mai le 1 × 107 trophozoites i le 1 ml o le TRIzol reagent (Vazyme, Nanjing, Saina), genomic DNA na maua mai le G. duodenalis RNA atoa e faʻaaoga ai MonScript dsDNase (Monad, Wuhan, Saina) ma faʻapipiʻi DNA (cDNA) faʻatasi. fa'aaoga MonScript RTIIII Super Mix (Monad) e tusa ai ma fa'atonuga a le gaosi oloa.
O faʻamatalaga faʻasologa o le CDS mo le sini G. duodenalis gene na maua mai le NCBI GenBank.Fa'aoga le Primer 5.0 e fa'ata'ita'i ai fa'ama'i fa'amaufa'ailoga fa'apitoa mo kenera ta'itasi.O le pito i luma (5'-3') e aofia ai vaega e tolu: o se faʻasologa faʻasolosolo faʻatasi ma se vector linearized pcDNA3.1(+) EcoRV (TGGTGGAATTTCTGCAGAT) ma amata codons ATG ma GNN (pe afai o le faavae muamua e le o G).E faia lenei mea e faʻaleleia ai le lelei o le faʻamatalaga.E le gata i lea, ia le itiiti ifo i le 16 bp fa'avae tu'ufa'atasi (GC content 40–60%/Tm approx. 55 °C).O le pito i tua (5'-3') e aofia ai vaega e lua, o se faʻasologa faʻasolosolo faʻatasi ma le EcoRV-linearized vector pcDNA3.1(+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT) ma se faʻavae tuʻufaʻatasia a itiiti mai 16 bp.(e le aofia ai taofi mulimuli e lua).fa'avae) se codon e pei o le AA po'o le GA e fa'ataga ai plasmids toe tu'ufa'atasi e fa'aalia a latou polotini fa'ailoga).O fa'asologa muamua o lo'o lisiina ile Laulau 1 ma sa fa'apipi'iina e Kangmet Biotechnology Co., Ltd. (Changchun, Saina).
O sini na faʻalauteleina e faʻaaoga ai le Pfu DNA polymerase (Tiangen, Beijing, Saina) poʻo le Ex-taq (Takara Biomedical Technology [Beijing] Co., Ltd., Beijing, Saina) e faʻaaoga ai le G. duodenalis cDNA ua saunia e fai ma faʻataʻitaʻiga.O le eukaryotic expression vector plasmid pcDNA3.1(+) na fa'aogaina fa'atasi ma le fa'atapula'aina enzyme EcoRV ma fa'a'ese'ese fa'aaoga le Fast AP (Thermo Fisher Scientific).Linearized pcDNA3.1(+) fragments ma amplified target gene fragments na faʻamamaina e faʻaaoga ai se pusa faʻamamaina o le DNA gel (Tiangen) ma faʻatusatusa i le faʻaaogaina o le Nanodrop ND-2000 (Thermo Fisher Scientific).O le pcDNA3.1 (+) fragment ma faʻasologa o kenera taʻitasi na toe tuʻufaʻatasia e faʻaaoga ai le MonClone faʻafefiloi faʻapotopotoga tasi (Monad Biotech Co., Ltd., Suzhou, Saina) ma faʻamaonia e le DNA sequencing e faʻaaoga ai Comate Bioscience Company Limited (Changchun, Saina) ..
Endotoxin-free plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 ma le pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 na gaosia e fa'aaoga ai le SanPrep Endotoxin-free Plasmid Mini Kit (Sangon Biotech).O le faʻatonuga na faʻatumauina i luga aʻe o le 500 ng / μl e faʻamautinoa ai o le EDTA i le elution buffer e leʻi faʻalavelaveina le suʻega o felauaiga.Primary mouse peritoneal macrophages na faʻatupuina i 6-well plates ma atoatoa RPMI 1640 medium (Biological Industries) mo le 12 itula, ona fufuluina lea o sela 3 taimi i le PBS mafanafana e aveese ai penicillin ma streptomycin, ona faʻaopoopoina lea i le auala atoa.Endotoxin-free plasmids pcDNA3.1 (+) -alpha-2 ma pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 (2.5 μg) na faʻafefeteina i le 125 μl o le Opti-MEM faʻaititia le serum medium (Gibco, Thermo Fisher Scientific) ..Ona 5 µl o Lipofectamine 2000 transfection reagent (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific) sa fa'afefeteina ile 125 μl ole serum Opti-MEM medium medium.Saunia liposome-DNA lavelave e ala i le faʻafefiloi o le endotoxin-free plasmid faʻafefiloi ma Lipofectamine 2000 ma faʻataga le paluga e tu i le vevela o le potu mo le 5 minute.Fa'asolo ese mea lavelave i sela i totonu o vaieli taitasi ma fa'afefiloi malie.Ina ua maeʻa le 4 itula, na suia le aganuʻu aganuʻu i le 2 ml o le RPMI 1640 atoa ma faʻaauau le aganuu mo le 24 itula.Na fa'aopoopoina le aganu'u fou ole aganu'u ile sela ma fa'a'ofuina mo taimi eseese e fa'atatau ile mamanu su'esu'e.
O faʻataʻitaʻiga polotini mai supernatants ma cell lysates na saunia e pei ona faʻamatalaina muamua [25].Faʻasologa o le fesiitaiga o le membrane mo pro-IL-1β, pro-caspase-1, caspase-1 p20, NLRP3, β-actin, ma Lona-tag e 200 mA / 90 min.Mo interleukin 1β (IL-1β; R & D Systems, Minneapolis, Minnesota, ISA), caspase-1 (p20) (Adipogen, Suitiselani) ma NLRP3 (Adipogen SA, Epalinges, Suiselani) ma 1: 5000 faʻatatau i Lana pine (Amylet Scientific, Wuhan, Saina) ma le β-actin (Proteintech, Wuhan, Saina).
O fesoʻotaʻiga faʻatasi ma le succinimide suberate (DSS) na faia e pei ona faʻamatalaina muamua [26].O sela na fufulu fa'atolu i le PBS malulu ma fa'amama atoa i le nila 27 gauge i le 50 µl ASC reaction buffer (pH 8.0) e iai le 25 mM Na2PO4, 187.5 mM NaCl, 25 mM HEPES ma le 125 mM NaHCO3.O le faʻafefiloi na faʻapipiʻiina i le 5000 g mo le 3 min ma le pellet na suʻeina i le 10 μl DSS (25 mM i le DMSO) ma le 40 μl ASC faʻafefe tali mo le 30 min i le 37 ° C.Ina ua maeʻa le centrifugation i le 5000 g mo le 10 min, na solo le pellet i se vaifofo o le 40 μl o le ASC reaction buffer ma le 10 μl o le 6x protein loading buffer (TransGen, Beijing, Saina), ona tineia ai lea o le fofo i le vevela o le potu mo le 15. min., Ona kuka lea mo le 10 minute.O faʻataʻitaʻiga o polotini na faʻataʻitaʻiina i le paʻu i Sisifo e faʻaaoga ai le anti-ASC antibodies (Wanleibio, Shenyang, Saina) i le fua faʻafefiloi o le 1:500.
I le maeʻa ai o se faʻataʻitaʻiga na faʻamatalaina muamua [13], na seleseleina supernatants aganuʻu cell ma faʻamautu le faʻaogaina o le cytokine pro-inflammatory IL-1β e faʻaaoga ai le kiore IL-1 Beta ELISA kit (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific).Su'e tau o le OD450nm i fa'apolotini fa'aoga e fa'aaoga ai le fa'asologa masani o le IL-1β.
O sela o loʻo ufiufi i luga o laupepa na fufulu malie 3 taimi i le mafanafana PBS, faʻamau i totonu o le cell cell fixative (Biosharp, Beijing, Saina) mo le 10 min i le vevela o le potu (RT), i le 0.1% Triton X-Permeabilize i le 100 (diluted in PBS; Biosharp ) mo le 20 minute i le vevela o le potu ma poloka i le 5% bovine serum albumin (i le PBS) mo le 2 itula i le vevela o le potu.O sela na fa'asusuina i le po i le 4 ° C fa'atasi ai ma antibodies muamua e faasaga i le ASC (1: 100 dilution) poʻo le NLRP3 (1: 100 dilution), i le faasologa, ma le Cy3 faʻailoga 'oti anti-rabbit IgG (H + L) (1: 400; EarthOx. , San Francisco, CA, ISA) poʻo le FITC-conjugated goat anti-mouse IgG (1:400; Earthox) i le po i le 37°C i le pogisa mo le 1 itula.O le nuclei na pisia i le Hoechst 33258 (10 μg / ml; UE, Suzhou, Saina) mo le 5 minute ma matauina i lalo o le microscope fluorescence (Olympus Corporation, Tokyo, Iapani).
Na vaevaeina isumu i ni vaega se fa (n = 7 i vaega taʻitasi): (i) PBS-togafitiga le lelei vaega pulea (PBS naʻo; gavage 100 μl / isu PBS sosoo ai ma le tui intraperitoneal i aso uma 100 μl / isu PBS 3 itula mulimuli ane)., fa'aauau mo le 7 aso);(ii) kulupu fa'atonutonu leaga na togafitia i le inhibitor MCC950 [27] (100 µl/mouse e ala i le PBS gavage, 3 itula mulimuli ane, 10 mg/kg le mamafa o le tino [BW] MCC950 [i le PBS] na fa'atonuina i totonu ole aso, umi 7 aso);(iii) G. duodenalis cyst infection group (1.5 x 106 cysts/mouse e ala i le gavage, 3 itula mulimuli ane, 100 μl/mouse PBS intraperitoneally faia i aso uma mo 7 aso);(iv) G. duodenalis cyst tu'ufa'atasi fa'ama'i vaega MCC950 inhibitor vaega togafitiga (1.5 × 106 kisi / isu e ala i gavage, 10mg/kg mamafa tino MCC950 intraperitoneally i aso uma mo 7 aso i le 3h).O le mamafa o le tino o isumu taʻitasi na mataʻituina i aso uma ma o isumu uma na faʻaumatia i le aso 7th.O le duodenum seleseleina (3 cm le umi) na tipiina i ni vaega laiti i le 1 ml PBS, na faʻaumatia cysts i le po i le PBS i le 4 ° C, ma G. duodenalis trophozoites.O le duodenum fou (1 cm le umi) na tu'u'ese'ese mo le staining o le hematoxylin ma le eosin (H&E).
Na vaevaeina isumu i ni vaega se lua: (i) MOCK control group ma (ii) MCC950 inhibitor group.E lima togafitiga i vaega taʻitasi (n = 7 / vaega o togafitiga): (i) PBS togafitiga le lelei le pulea vaega (PBS naʻo; 100 μl / mouse PBS, intramuscular (IM) tui (tibialis anterior) [28, 29];( ii) pcDNA3.1(+) plasmid vaega e pulea lelei (100 µg/mouse DNA, e ala i tui intramuscular) (iii) G. duodenalis cyst fa'ama'i fa'ama'i lelei vaega (1.5 x 106 kisi/isu, e ala i gavage) (iv) a vaega o lo'o togafitia ile plasmid pcDNA3.1(+)-alpha-2 (100 μg/mouse DNA, e ala ile intramuscular injection), ma (v) o se vaega e togafitia ile plasmid pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (100 μg/mouse DNA, ina ua maeʻa itula 12, na maua e mice i le MCC950 inhibitor group se tui intraperitoneal i aso taʻitasi o le MCC950 (10 mg / kg mamafa o le tino) mo aso 7, aʻo maua e isumu i le vaega MOCK se voluma tutusa o le PBS. aoina mai isumu mata ma tu'u i le po i le 4 °C fa'ata'ita'iga o le toto na tu'ufua e fa'aaoga ai le enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) mo ma fua o le IL-1β.
E tolusefululima isumu na vaevaeina i vaega e lima (n=7/group).Vaega 1 o se vaega le lelei o le pulea na togafitia i le PBS: na maua e mice le 100 μl o le PBS intramuscularly ma le 3 aso mulimuli ane e ala i le gavage.Vaega 2 o se vaega pulea lelei ua pisia i G. duodenalis cysts: isumu na tui i le 100 μl o le PBS, ma 3 aso mulimuli ane 1.5 x 106 cysts / isu na tui intragastrially.Vaega lona tolu - tui puipui plasmid ma pcDNA3.1 (+) faʻatasi ma se vaega e pulea mo faʻamaʻi pipisi o le duodenal cyst: isumu maua 100 μg o le plasmid DNA pcDNA3.1 (+) (im) tautala, 1.5 × 106 cysts / isumu 3 mo le tele aso.Vaega 4 ma le 5 o le recombinant pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine plasmid poʻo le pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardine plasmid faʻatasi ma le G. duodenalis cyst infection.Vaega faʻataʻitaʻi: na maua e isumu le 100 µg o le pcDNA3.1(+)-giardine plasmid DNA (im), ona 3 aso mulimuli ane, 1.5 × 106 cysts/mouse na tui e ala i gavage.O le mamafa o le tino o isumu taʻitasi na mataʻituina pe a maeʻa le faʻaofiina o le G. duodenalis cyst e ala i le paipa.O le duodenum fou na aoina mo le fuaina o uta parasitic ma suʻesuʻega staining HE.
Na suʻesuʻeina suiga o le histopathological e tusa ai ma se faʻasalalauga muamua [30].O le duodenum fou na faʻapipiʻiina i le mea faʻapipiʻi sela, faʻapipiʻi i le paraffini, tipi i vaega 4 μm, pisia i le H&E ma suʻesuʻe i lalo o se microscope malamalama.O suiga faʻapitoa faʻapitoa i vaega e fitu o le tino mai isumu tutoatasi e fitu na iloiloina e se fomaʻi maʻi e leʻi iloa le togafitiga ma na puʻeina i le 200x magnification.O le umi o le villi ma le loloto o le crypts na fuaina e tusa ai ma auala na faʻamatalaina muamua.
O fa'ai'uga in vitro ma in vivo na maua i fa'atolu.Na fa'atupuina kalafi e fa'aaoga ai le GraphPad Prism 7.00 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, ISA).O eseesega i le va o vaega e lua na suʻesuʻeina e le suʻega-t, ae o le eseesega i le va o ≥3 vaega na suʻesuʻeina e ala i le tasi-auala suʻesuʻega o eseesega (ANOVA) e faʻaaoga ai le SPSS software (version 22.0; SPSS IBM Corp., Armonk, NY, USA).Sa suʻesuʻeina faʻamaumauga mo le tutusa o le eseesega e faʻaaoga ai le suʻega a Levene sosoo ai ma le suʻega post hoc a Bonferroni (B).O le taua o loʻo faʻaalia i le P<0.05, P<0.01, ma le P<0.001 (le taua [ns]) (P>0.05).
O a matou suʻesuʻega talu ai o GEV proteomics i le Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) na faʻaalia ai le tele o sini e ono aʻafia i le faʻagaoioia o ala faʻailoga inflammatory [13].Na matou filifilia ni sini fa'amoemoe e lua, alpha-2 ma alpha-7.3 giardins, fa'asili nei mole mole ma fa'aogaina e fausia ai le pcDNA3.1(+) eukaryotic expression vector.Ina ua maeʻa le faʻasologa, o le pcDNA3.1 (+) -alpha-2 ma le alpha-7.3 giardine expression plasmids na faʻafeiloaʻi i totonu o le macrophages peritoneal muamua, ma o le caspase-1 p20 saini porotini o le mumū (se vaega o le caspase-1 faʻagaoioia) na iloa. e pei o le faʻamalamalamaina o molelaʻau autu e mafai ona faʻaosoina le mumū.O faʻaiʻuga na faʻaalia ai o le alpha-2 ma le alpha-7.3 giardines e mafai ona faʻaosofia le p20 caspase-1 faʻaaliga tutusa ma GEV.Leai se aafiaga i le caspase-1 activation na maua i le pulea lelei e leʻi togafitia (PBS naʻo) ma le plasmid control pcDNA3.1 (+) (Ata 1).
Fua o le p20 caspase-1 faʻagaioiga e pcDNA3.1 (+) -alpha-2 ma alpha-7.3 giardins.Recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1(+) -alpha-2 ma alpha-7.3 giardines (i luga aʻe o laina taʻitasi) na faʻafeiloaʻi i totonu o le macrophages peritoneal muamua o le isumu ma le supernatants aganuu na seleseleina 24 itula mulimuli ane.Na fa'aogaina le poloka i Sisifo e fua ai le maualuga o fa'aaliga o le saini caspase-1 p20 inflammasome protein.Ole vaega ole togafitiga ole PBS (lane C) ma le pcDNA3.1 (+) monotherapy group (pcDNA3.1 lane) na faʻaaogaina e avea o se faʻatonuga le lelei, ma na faʻaaogaina le vaega o togafitiga GEV e avea o se pulea lelei.O le faʻaalia o le polotini recombinant na faʻamaonia e ala i le suʻeina o le histidine tag i totonu o porotini taʻitasi, ma o le faʻamoemoeina o porotini o le alpha-2 giardine (38.2 kDa) ma le alpha-7.3 giardine (37.2 kDa).GEV, Giardia duodenum vesicle extracellular, pcDNA3.1(+), EcoRV-linearized vector, SUP, supernatant
Ina ia iloa pe o le alpha-2 giardine ma le alpha-7.3 giardine e faʻaosofia ai le p20 caspase-1 faʻaaliga ma faia se sao i le faʻagaoioia o le tali a le NLRP3 inflammatory, pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine ma pcDNA3.1 (+) -alpha -7.3 giardin na faʻafeiloaʻi i totonu o le macrophages peritoneal muamua o le isumu ma le DNA plasmid recombinant, ma le maualuga o faʻamatalaga, localization, ma le oligomerization o le inflammatory proteins NLRP3 na fuafuaina.I lenei faʻataʻitaʻiga, na faʻaaogaina le GEV e avea ma vaega e pulea lelei, ma o le vaega e leai se togafitiga (PBS naʻo) poʻo le pcDNA3.1 (+) faʻafeiloaʻiga o togafitiga o le vaega le lelei.O faʻaiʻuga na faʻaalia ai, e pei o le GEV group, recombinant plasmid DNA o giardin pcDNA3.1 (+) -alpha-2 ma giardin pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 na mafua ai le faʻatonutonuina o le NLRP3, pro-IL-1β ma procaspase-1 ma caspase-1 faʻagaioiga (Fig. 2a).E le gata i lea, o giardines e lua na faʻaosoina ai le faʻaogaina o le IL-1β (pcDNA3.1: ANOVA, F (4, 10) = 1.625, P = 0.1000; alpha-2 giardine: ANOVA, F (4, 10) = 1.625, P = 0.0007 ).;alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P<0.0001;GEV: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.0047) (Ata 2b).O le tele o polotini a le ASC sa monomeric i le vaega e leai ni togafitiga poʻo le vaega o togafitiga na faʻafeiloaʻi ma le pcDNA3.1 (+) plasmid, e ese mai i le pcDNA3.1 (+) -alpha-2 poʻo le pcDNA3.1 (+) -alpha- 7.3 giardine.ASC oligomerization na tupu i le recombinant plasmid DNA o le GEV lelei pulea vaega poʻo le vaega, faʻaalia se foliga oligomeric (Ata 2c).O nei faʻamatalaga muamua o loʻo fautua mai ai o le alpha-2 giardine ma le alpha-7,3 giardine e mafai ona faʻaosofia ai le faʻamalosia o le NLRP3.O suʻesuʻega immunofluorescent mulimuli ane o le localization o le ASC ma le NLRP3 na faʻaalia ai i le vaega le lelei o le pulea, o le ASC protein na faʻasalalau i totonu o le cytoplasm ma faʻaalia o se faailoga togi i luga o le faʻaosofia o le pcDNA3.1 (+) -alpha-2 ma giardine poʻo le pcDNA3.1 (+) -alpha-7,3 giardine vaega poʻo le GEV lelei faʻatonutonu vaega (Ata 2d).I le pulea lelei ma le plasmid-treated pcDNA 3.1 vaega, o le NLRP3 protein signal e leʻi iloa, aʻo se togi faʻailoga e tali atu i le pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine poʻo le pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 na iloa..giardine o loʻo maua i le cytoplasm poʻo luga o le faʻamalosia o le HEV (Fig. 2e).O nei faʻamatalaga e faʻaalia atili ai o le G. duodenalis giardin alpha-2 ma le giardin alpha-7.3 faʻagaoioia le NLRP3 inflammasome i le kiore matua peritoneal macrophages.
pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin ma le pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin fa'agaoioia le NLRP3 inflammasome i isumu peritoneal macrophages.Fa'aliliuina le recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin ma pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin i totonu o le murine peritoneal macrophages muamua ma sela, poʻo le seleseleina o le supernatant i totonu ole 24 h mo le auiliiliga o faʻamatalaga, oligomerization , fa'alilo.ma localization o polotini inflammatory autu.O le PBS-naʻo (C) vaega ma le pcDNA3.1 (+) faʻapitoa togafitiga faʻapitoa na faʻaaogaina e avea ma pule le lelei, ma na faʻaaogaina le vaega o togafitiga GEV e avea ma vaega lelei.a Key inflammatory proteins NLRP3, e aofia ai le NLRP3, pro-IL-1β, pro-caspase-1, ma le p20 caspase-1, na iloa e Western blotting.b O le maualuga o le fa'alilolilo o le IL-1β i totonu o supernatants na fuafuaina e fa'aaoga ai le enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).O eseesega i le va o le pulea ma vaega faʻataʻitaʻiga na suʻesuʻeina e ala i le tasi-way analysis of variance (ANOVA) faʻaaogaina le SPSS software version 22.0.Asterisk o loʻo faʻaalia ai le eseesega tele i le va o vaega ** P<0.01 ma *** P<0.001.c ASC oligomerization tulaga i pellets na fuafuaina e le DSS cross-linking auʻiliʻiliga, aʻo tulaga ASC i cell lysates sa faʻaaogaina e fai ma pule o uta.d Va'aiga o le ISC localization fa'aoga immunofluorescence.e Immunofluorescence na faʻaaogaina e vaʻaia ai le faʻaogaina o le NLRP3.ASC, polotini pei-pei o le apoptotic speck;IL, interleukin;NLRP3, nucleotide-binding oligomerization-like receptor 3;ns, e le taua (P > 0.05)
O le G. duodenalis ma le GEV na te faʻamalo e faʻagaoioia le NLRP3 inflammasome ma faʻatonutonu tali faʻamaʻi talimalo ile vitro.O le mea lea, o le matafaioi a le NLRP3 inflammasome i le pathogenicity o G. duodenalis e tumau pea le le manino.Ina ia suʻesuʻeina lenei mataupu, na matou fuafuaina se faʻataʻitaʻiga i le va o isumu ua aʻafia i le G. duodenalis cyst ma isumu ua aʻafia i le G. duodenalis cyst + MCC950 inhibitor togafitiga ma faʻatusatusa le NLRP3 inflammasome expression pe a aʻafia i le G. duodenalis cyst.O se fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'iga o lo'o fa'aalia ile Ata 3a.Suiga i le mamafa o le tino o isumu i vaega eseese o togafitiga na mataʻituina mo le 7 aso talu ona faʻamaʻi pipisi, ma o faʻaiʻuga o loʻo faʻaalia i le Ata 3b.Pe a faatusatusa i le vaega na togafitia i le PBS mama, o taunuuga na faaalia ai (i) o le mamafa o le tino o isumu na aafia i le G. duodenalis cyst na faaitiitia mai le aso 3 i le aso 7 pe a uma le siama;(ii) o togafitiga ma le inhibitor MCC950 e leai se aafiaga taua i le mamafa o le tino o isumu..Pe a faʻatusatusa i le vaega faʻamaʻi e tasi, o le BW o le faʻamaʻi pipisi o le duodenal na togafitia i le MCC950 na faʻaitiitia i tikeri eseese (Aso 1: ANOVA, F (3, 24) = 1.885, P = 0.0148; Aso 2: ANOVA, F (3, 24). ) = 0.4602, P<0.0001; Aso 3: ANOVA, F(3, 24) = 0.8360, P = 0.0010; (3, 24)=0.6497, P=0.0645; Aso 6: ANOVA, F(3,24)=5.457, P=0.0175; Aso 7: ANOVA, F(3, 24) = 2.893, P = 0.0202;O nei faʻamaumauga o loʻo faʻaalia ai o le NLRP3 inflammasome e puipuia ai isumu mai le paʻu tele o le mamafa i le amataga (2-4 aso) o faʻamaʻi pipisi o le duodenal.Ona matou faʻamoemoe lea e suʻe G. duodenalis trophozoites i le sua solo o le duodenal ma o taunuuga o loʻo faʻaalia i le Ata 3c.Pe a faʻatusatusa i le G. duodenalis cyst faʻamaʻi pipisi, o le numera o trophozoites i le duodenum na matua faateleina pe a uma ona poloka le NLRP3 inflammasome (t (12) = 2.902, P = 0.0133).Duodenal tissues na pisia i HE na faʻaalia, faʻatusatusa i le le lelei o le pulea na togafitia i le PBS ma le MCC950 naʻo: (i) G. duodenalis cyst infection na mafua ai le faaleagaina o le duodenal villi (ANOVA, F(3, 24)=0.4903, P= 0.0488 ) ma crypt atrophy (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0.0089);(ii) duodenum mai isumu ua pisia ile G. duodenalis cysts ma togafitia ile MCC950 inhibitors.duodenal villi na faaleagaina ma mate (ANOVA, F (3, 24) = 0.4903, P = 0.0144) faʻatasi ai ma le atrophy ma le crypt branching (ANOVA, F (3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (Fig. 3d- f).O nei taunuuga e taʻu mai ai o le NLRP3 inflammasome e iai sona sao i le faʻaitiitia o le pathogenicity o G. duodenalis.
Matafaioi a le NLRP3 inflammasome i Giardia duodenum faʻamaʻi.O isumu na sasaina (iv) ile duodenococcal cysts ona togafitia lea ile MCC950 (ip) pe leai foi.O vaega o togafitiga faʻatasi ma le PBS poʻo le MCC950 na faʻaaogaina e fai ma taʻiala.Vaega faʻataʻitaʻi ma le faʻasologa o togafitiga.b O le mamafa o le tino o isumu i vaega taʻitasi o togafitiga na mataʻituina mo le 7 aso.O le eseesega i le va o le G. duodenalis infection group ma le G. duodenalis + MCC950 faʻamaʻi faʻamaʻi vaega na suʻesuʻeina e le t-suʻega e faʻaaoga ai le SPSS software version 22.0.Asterisk e faʻaalia ai le tele o eseesega ile *P<0.05, **P<0.01, poʻo le ***P<0.001.c O le uta parasite na fuafuaina e ala i le faitauina o le aofaʻi o trophozoites i le sua o le duodenal lavage.O le eseesega i le va o le G. duodenalis infection group ma le G. duodenalis + MCC950 faʻamaʻi faʻamaʻi vaega na suʻesuʻeina e le t-suʻega e faʻaaoga ai le SPSS software version 22.0.Asterisk o loʻo faʻaalia ai le tele o eseesega ile *P <0.05.d Hematoxylin ma eosin (H&E) staining i'uga o le su'esu'ega o le duodenal.O aū mumu e faʻaalia ai le faʻaleagaina o le villi, o aū lanu meamata e faʻaalia ai le faʻaleagaina o crypts.Fua fua: 100 µm.u, f Su'esu'ega fa'afuainumera o le maualuga o le duodenal villus ma le maualuga o le kiore.Asterisk o loʻo faʻaalia ai eseesega taua ile * P<0.05 ma ** P<0.01.O fa'ai'uga e maua mai i su'esu'ega fa'ale-natura tuto'atasi e 7.BW, mamafa o le tino;ig, auala e avatu ai i totonu o le gastric;ip, auala e avatu ai le intraperitoneal;ns, e le taua (P> 0.05);PBS, phosphate buffered saline;WT, ituaiga vao
O le fa'alilolilo o le IL-1β o se fa'ailoga o le fa'agaioiina o le mumū.Ina ia iloa pe faʻagaoioi e le G. duodenalis alpha-2 giardine ma le alpha-7.3 giardine le NLRP3 host inflammasome in vivo, matou te faʻaaogaina le WT mice (sham group) ma le NLRP3 inflammasome-blocked mice (MCC950 inhibited treatment group).O se fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'iga o lo'o fa'aalia ile Ata 4a.O vaega faʻataʻitaʻiga e aofia ai isumu na togafitia i le PBS, G. duodenalis cyst treatment by gavage, intramuscular injection of pcDNA3.1, ma intramuscular injection of pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine poʻo le pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine.I le aso 7th i le maeʻa ai o le intramuscular administration o le plasmid recombinant, na aoina le serum ma faʻamautu le maualuga o le IL-1β i vaega taʻitasi.E pei ona faʻaalia i le Ata 4b, i le vaega MOCK: (i) faʻatusatusa i le vaega PBS, pcDNA3.1 togafitiga e leai se aafiaga taua i le IL-1β faʻalilolilo (ANOVA, F (4.29) = 4.062, P = 0.9998), peitaʻi, IL-β fa'alilolilo na matua maualuga i le G. duodenalis cyst group (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine ma pcDNA3.1- Intramuscular tui o le alpha-7.3 giardine faʻateleina le maualuga o le serum IL-1β (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P<0.0001);(iii) pcDNA3.1-alpha-7,3 giardine fa'aosoina maualuga maualuga o le IL -1β fa'alilolilo i le pcDNA3.1-alpha-2 giardine intramuscular injection group (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P = 0.0333) .Faʻatusatusa i vaega taʻitasi i le MCC950 togafitiga vaega ma le vaega MOCK: (i) IL-1β faʻalilolilo tulaga i le vaega pulea PBS ma le vaega pulea pcDNA3.1 faaitiitia i se tulaga patino ina ua uma ona poloka le inhibitor MCC950, ae o le eseesega e le o. taua (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) ina ua uma ona poloka le MCC950., IL-1β fa'alilolilo na matua fa'aitiitia i le G. duodenalis cyst-infected group, le pcDNA3.1-alpha-2 giardine group, ma le pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine group (G. duodenalis: ANOVA, F(9). , 58) = 3.540 , P = 0.0120; pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(9, 58) = 3.540, P = 0.0447; ) = 3.540, P = 0.0164).O nei taunuʻuga o loʻo fautua mai ai o le alpha-2 giardine ma le alpha-7.3 giardine e faʻatautaia le faʻagaoioia o le NLRP3 inflammasome i vivo.
pcDNA3.1 (+) -giardines faʻagaoioia le NLRP3 host inflammasome in vivo.O isumu na tui (IM) i le recombinant eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine poʻo le pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine ona togafitia lea i le MCC950 (ip; MCC950 group) pe leai (dummy group). ).O le PBS poʻo le pcDNA3.1 (+) plasmid treatment group na faʻaaogaina e avea o se faʻatonuga le lelei, o le G. duodenalis cyst treatment group na faʻaaogaina e avea o se pulea lelei.Vaega faʻataʻitaʻi ma le faʻasologa o togafitiga.b Ole maualuga ole IL-1β ile isumu na fuaina ile aso 7 ile suʻega ELISA.O eseesega i le va o vaega i le vaega MOCK na suʻesuʻeina e ala i le ANOVA e tasi, ma o eseesega i le va o le vaega MOCK ma le vaega MCC950 na suʻesuʻeina e faʻaaoga ai le suʻega o le SPSS software version 22.0.Asterisk o loʻo faʻaalia ai eseesega taua i le va o vaega o togafitiga i le vaega MOCK, * P <0.05 ma *** P <0.001;fa'ailoga tala ($) o lo'o fa'ailoa mai ai le eseesega tele i le va o vaega ta'itasi i le vaega MOCK ma le vaega MCC950 i le P<0.05.I'uga o su'esu'ega tuto'atasi e fitu.i, tui intramuscular, ns, e le taua (P> 0.05)
Ina ia suʻesuʻeina le aʻafiaga o le alpha-2 ma le alpha-7.3 giardine-mediated activation o le NLRP3 host inflammasome i luga o le G. duodenalis infectivity, matou te faʻaaogaina WT C57BL / 6 mice ma tui alpha-2 giardine ma alpha-7.3 giardine.na tui le plasmid intramuscularly, ina ua mavae aso 3 e ala i le gastric tube o le G. duodenalis cyst, ina ua uma ona matauina isumu mo le 7 aso.O loʻo faʻaalia se ata auiliili o le suʻega i le Ata 5a.O le mamafa o le tino o isumu taʻitasi na fuaina i aso uma, faʻataʻitaʻiga o mea fou duodenal na aoina i le aso 7 i le maeʻa ai o le faʻaogaina e ala i le gastric tube, na fuaina le numera o trophozoites, ma na matauina suiga o le histopathological.E pei ona faʻaalia i le Ata 5b, faʻatasi ai ma le faʻateleina o le taimi fafaga, o le BW o isumu i vaega taʻitasi na faʻasolosolo malie lava.O le MT o isumu na amata ona faʻaitiitia i le aso 3rd ina ua maeʻa le pulega intragastric o G. duodenalis cysts, ona faʻasolosolo malie ai lea.O le faʻamalosia o le NLRP3 inflammasome faʻaosoina e le tui intramuscular o le alpha-2 giardine ma le alpha7.3 giardine na matua faʻaitiitia ai le paʻu o le mamafa i isumu (Aso 1: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 1.399, P = 0 .9754 Aso 1: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30)=1.399, P=0.9987 Aso 2: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F( 4, 30) = 0.3172, P = 0.9979; Aso 2: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.8409; 4, 30) = 0.8222, P = 0.0262 Aso 3: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.8222, P = 0.0083 Aso 4: pcDNA3.1-alpha-2 giardine , F(4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, Aso 4: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5620, P <0.0001, Aso 5: pcDNA3.1-alpha - 2 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.9728, P <0.0001 Aso 5: pcDNA3.1-alpha -7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.9728, P <0.0001 Aso 6: pcDNA3 . alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, Aso 6: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;Aso 7: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P<0.0001 Aso 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P <0.0001).Na suʻesuʻeina le uta parasitic i le duodenum (Fig. 5c).Pe a faatusatusa i le pulea lelei e leʻi togafitia ma le vaega na tui i le pcDNA3.1 vector gaogao, o le numera o G. duodenalis trophozoites na matua faʻaitiitia i vaega na tui i le α-2 giardine ma le α-7,3 giardine (pcDNA3.1-alpha). -2 giardine : ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0002, pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P<0.0001).E le gata i lea, o le giardine alfa-7.3 na sili atu ona puipuia i isumu nai lo giardine alfa-2 (ANOVA, F (3, 24) = 1.209, P = 0.0081).O faʻaiʻuga o le faʻailoga HE o loʻo faʻaalia i le fig.5d–f.O isumu na tui i le alpha-2 giardine ma le alpha-7.3 giardine e itiiti ni manua o le duodenal tissue, na faʻaalia i le faaleagaina o villus, faʻatusatusa i isumu na tui i le G. duodenalis ma le isumu na tui i le G. duodenalis faʻatasi ma se pcDNA3 vector gaogao .1 Zoom.(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0035 poʻo P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0028 poʻo P = 0.0055) ma faʻaitiitia le atrophy crypt (pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F (3, 24) = 1.470, P = 0.0264 poʻo P = 0.0158; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine , F(3, 24) = 1.470, P = 0.0371 poʻo le P = 0.0191).O nei taunuʻuga e taʻu mai ai o le alpha-2 giardine ma le alpha-7,3 giardine e faʻaitiitia ai le faʻamaʻi o le G. duodenalis e ala i le faʻagaoioia o le NLRP3 inflammasome i vivo.
Matafaioi a le pcDNA3.1(+)-giardins i le G. duodenalis infection.O isumu na tui (IM) i le recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine poʻo le pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine ona luʻiina lea i G. duodenalis cysts (ig).O le vaega PBS ma le pcDNA3.1 (+) + duodenal cyst treatment group na faʻaaogaina e avea ma vaega e le lelei, ma o le duodenal cyst treatment group na faʻaaogaina e avea ma vaega lelei.Vaega faʻataʻitaʻi ma le faʻasologa o togafitiga.b O le MT o isumu i vaega taʻitasi o togafitiga na mataʻituina mo le 7 aso pe a uma le luʻitau.Asterisk o loʻo faʻaalia ai le tele o eseesega i le va o vaega i le G. duodenalis group ma le pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine group, * P <0.05, ** P <0.01, ma *** P <0.001;o le faʻailoga tala ($) o loʻo faʻaalia ai se eseesega tele i le va o vaega taʻitasi o G. duodenalis ma le pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 jardine group, $$P<0.01 ma le $$$P<0.001.c O le uta parasite na fuafuaina e ala i le faitauina o le numera o trophozoites i le 1 ml o le duodenal lavage mai le duodenum (3 cm le umi) ma faʻaalia o le numera o parasites i le cm o le duodenum.Eseesega i le va o le vaega G. duodenalis fa'ama'i pipisi, le pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine vaega, ma le pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine vaega na su'esu'eina e le ANOVA e tasi le ala e fa'aaoga ai le SPSS software version 22.0.Asterisk o loʻo faʻaalia ai eseesega taua ile ** P<0.01 ma *** P<0.001.d Suiga fa'amasani i le duodenum.O aū mumu e faʻaalia ai le faʻaleagaina o le villi, o aū lanu meamata e faʻaalia ai le faʻaleagaina o crypts.Fua fua: 100 µm.e, f Su'esu'ega fa'amaumauga o le maualuga o le villus duodenal mouse (e) ma le maualuga o le crypt (f).Eseesega i le va o vaega i le Ata 1d na suʻesuʻeina e le ANOVA auala e tasi e faʻaaoga ai le SPSS software version 22.0.Asterisk o loʻo faʻaalia ai eseesega taua ile * P<0.05 ma ** P<0.01.I'uga o su'esu'ega tuto'atasi e fitu.ns, e le taua (P > 0.05)
Giardia duodenum o se fa'ama'i ta'uta'ua o le intestinal o tagata ma isi meaola e mafua ai le giardiasis.I le 2004, na aofia ai i le WHO Leglected Diseases Initiative ona o lona maualuga maualuga i luga o le 6 tausaga, aemaise lava i nuʻu e maualalo le tamaoaiga o le tamaoaiga [32].E taua tele le sao o le tino puipuia i le tali atu i le siama G. duodenalis.Ua lipotia mai e faʻafefeteina ma faʻaumatia G. duodenalis faʻamaʻi mataʻimu e ala i le tuʻuina atu o mailei extracellular [33].O a matou suʻesuʻega talu ai na faʻaalia ai o G. duodenalis, o se parasite extracellular e le faʻaleagaina, faʻaagaoioia p38 MAPK, ERK, NF-κB p65, ma NLRP3 ala faʻailoga inflammatory i macrophages kiore e faʻatonutonu ai tali inflammatory host, ma faʻamalolo GEV e mafai ona faʻaleleia ai lenei faagasologa.13], 24].Ae ui i lea, o PAMPs tonu o loʻo aʻafia i le NLRP3 inflammasome-regulated inflammation i GEV ma le matafaioi a le NLRP3 inflammasome i giardiasis e tumau pea ona faʻamalamalamaina.Ina ia faʻamalamalamaina nei fesili e lua, na matou faia lenei suʻesuʻega.
O le NLRP3 inflammasome o loʻo i totonu o le cytoplasm o siama puipuia ma e mafai ona faʻagaoioia e vaega eseese e pei o tioata uric acid, toxins, siama, siama, ma parasites.I suʻesuʻega faʻamaʻi, o toxins ua faʻailoaina o PAMPs autu e faʻagaoioia ai masini inflammatory, e oʻo atu ai i le mumū ma le oti o le cell [34].O nisi o vailaʻau eseese, e pei o le hemolysin mai Staphylococcus aureus [35] ma Escherichia coli [36], hemolysin BL (HBL) mai le enterotoxin (NHE) [37], faʻaosofia le faʻagaioiina o le mumu NLRP3.O suʻesuʻega faʻamaʻi ua faʻaalia ai o polotini faʻamaʻi e pei ole teutusi SARS-COV-2 (E) porotini [38] ma le Zika virus NS5 protein [39] o PAMP taua ia e iloa e le NLRP3 receptor.I suʻesuʻega faʻamaʻi, o le tele o parasite ua lipotia mai e fesoʻotaʻi ma le faʻaogaina o le inflammasome, e pei o Toxoplasma gondii, Trichomonas vaginalis [40], Trypanosoma cruzi [41], ma Leishmania [42].O polotini granule mafiafia GRA35, GRA42, ma le GRA43, e fesoʻotaʻi ma le faʻaleagaina o Toxoplasma gondii, e manaʻomia mo le faʻaosoina o le pyroptosis i le Lewis rat macrophages [43].E le gata i lea, o nisi o suʻesuʻega a Leishmania o loʻo taulaʻi atu i meaola taʻitasi o loʻo aʻafia i le NLRP3 inflammasome, e pei o le lipophosphoglycan membrane parasite [44] poʻo le zinc metalloprotease [45].Faatasi ai ma le faʻapipiʻi-pei o le alpha-giardin aiga o genes, alpha-1 giardin ua faʻaalia e avea o se sui tauva e mafai ona tuʻuina atu le puipuiga mai le G. duodenalis i se faʻataʻitaʻiga o le isumu [18].I la matou suʻesuʻega, matou te filifilia G. duodenalis virulence factor alpha-2 ma alpha-7,3 giardines, lea e tulaga ese i le giardia ae e itiiti lava le lipotia.O nei kenera fa'amoemoe e lua na fa'apipi'iina i le pcDNA3.1(+) eukaryotic expression system vector mo le su'esu'eina o le fa'agaioiina o le mumū.
I la matou fa'ata'ita'iga o isumu, o fasi caspase ua tipi e fai ma fa'ailoga o le fa'agaioiina o le inflammatory.I luga o le faʻamalosi, e fegalegaleai le NLRP3 ma le ASC, faʻapipiʻiina procaspases, ma faʻatupuina caspases malosi e pipii pro-IL-1β ma pro-IL-18 i le matua IL-1β ma IL-18, faasologa -18.O caspases inflammatory (caspases-1, -4, -5 ma -11) o se aiga faʻasaoina o cysteine ​​​​protease e taua tele mo le puipuiga faʻanatura ma e aʻafia i le mumu ma le faʻaogaina o le cell death [46].Caspase-1 o loʻo faʻagaoioia e canonical inflammasomes [47], aʻo caspases-4, -5, ma -11 o loʻo vavaeina i le taimi o le fausiaina o atypical inflammasomes [48].I lenei suʻesuʻega, na matou faʻaogaina ai macrophages peritoneal isumu e fai ma faʻataʻitaʻiga ma suʻesuʻeina le p20 caspase-1 faʻamaʻapeina caspase-1 e fai ma faʻailoga o le NLRP3 faʻamaʻi faʻafefe i suʻesuʻega o G. duodenalis infection.O faʻaiʻuga na faʻaalia ai o le tele o alpha-giardins e nafa ma le faʻagaoioia masani o le mumū, lea e ogatasi ma le mauaina o mole mole virulence autu o loʻo aʻafia i siama ma siama.Ae ui i lea, o la matou suʻesuʻega e naʻo se faʻataʻitaʻiga muamua ma o loʻo i ai isi molelaʻau e mafai ona faʻagaoioia inflammasomes e le masani ai, e pei o a matou suʻesuʻega talu ai na maua uma ai le faʻamaʻi masani ma le le masani i le G. duodenalis infection [13].Ina ia iloa atili pe o le p20 caspase-1 ua gaosia e fesoʻotaʻi ma le NLRP3 inflammasome, matou te faʻafeiloaʻi alpha-2 ma alpha-7.3 giardins i le kiore peritoneal macrophages e fuafua ai le maualuga o le faʻaaliga o le protein mole ma le ASC oligomerization levels, faʻamaonia o α-giardins uma e faʻagaoioia. fulafula NLRP3.O a matou taunuʻuga e laʻititi laʻititi mai i latou a Manko-Prykhoda et al., O le na lipotia mai o le faʻaosofia o le Caco-2 sela faʻatasi ma G. muris poʻo E. coli EPEC strains naʻo ia e mafai ona faʻateleina le malosi o le fluorescence o le NLRP3, ASC, ma le caspase-1, e ui lava e le taua tele, ae o le faʻafefea ona faʻateleina e le costimulation o G. muris ma E. coli le maualuga o le tolu polotini [49].O lenei eseesega atonu e mafua ona o eseesega i le filifilia o ituaiga Giardia, laina sela, ma sela muamua.Na matou faia foi i vivo suʻega e faʻaaoga ai le MCC950 i le 5-vaiaso fafine WT C57BL / 6 mice, lea e sili atu ona aʻafia i le G. duodenalis.O le MCC950 o se fa'atosina mole mole laiti NLRP3 malosi ma filifili e poloka ai le fa'agaioiina o le NLRP3 canonical ma non-canonical i nanomolar concentrations.MCC950 faʻalavelaveina le faʻagaioiina o le NLRP3 ae e le afaina ai le faʻagaoioia o AIM2, NLRC4, ma NLRP1 auala faʻamaʻi poʻo TLR ala faʻailoga [27].MCC950 poloka le NLRP3 activation ae le taofia le NLRP3 initiation, K + efflux, Ca2 + influx, poʻo le fegalegaleaiga i le va o le NLRP3 ma le ASC;nai lo lena, e taofia le NLRP3 inflammasome activation e ala i le poloka o le ASC oligomerization [27].O le mea lea, na matou faʻaogaina ai le MCC950 i se suʻesuʻega in vivo e fuafua ai le matafaioi a le NLRP3 inflammasome pe a uma le tui o le giardine.O le caspase-1 p10 ua faʻagaoioia e faʻapipiʻiina cytokines pro-inflammatory pro-IL-1β ma le pro-IL-18 i le IL-1β ma le IL-18 matua [50].I lenei suʻesuʻega, o le serum IL-1β maualuga i mice-togaina giardine ma pe leai foi MCC950 na faʻaaogaina e fai ma faʻamaoniga pe na faʻagaoioia le NLRP3 inflammasome.E pei ona faʻamoemoeina, o togafitiga MCC950 na faʻaitiitia ai le maualuga o le IL-1β i le toto.O nei faʻamatalaga faʻaalia manino o G. duodenalis giardin alfa-2 ma giardin alfa-7.3 e mafai ona faʻagaoioia le NLRP3 mouse inflammasome.
O faʻamaumauga taua na faʻaputuina i le sefulu tausaga ua tuanaʻi ua faʻaalia ai o le IL-17A o le pule sili lea o le puipuiga e faasaga ia G. muris, faʻaosofia le IL-17RA faʻailoga, gaosia peptides antimicrobial, ma le faʻatonutonuina o le faʻamalosia o le faʻamalosia [51].Ae ui i lea, o le faʻamaʻi Giardia e tupu soo i talavou matutua, ma ua lipotia mai o Giardia faʻamaʻi i isumu laiti e le faʻagaoioia le tali IL-17A e faʻatino ai lona puipuiga [52], faʻaosofia tagata suʻesuʻe e suʻe isi Giardia immunomodulatory.faiga ole fa'ama'i helminth.O tusitala o se suʻesuʻega talu ai nei na lipotia mai e mafai e G. muris ona faʻagaoioia le NLRP3 inflammasome e E. coli EPEC, lea e faʻamalosia ai le gaosiga o peptides antimicrobial ma faʻaitiitia ai lona gafatia faʻapipiʻi ma le numera o trophozoites i totonu o le intestinal tract, ma faʻaitiitia ai le mamafa o le colon. faʻamaʻi e mafua mai le bacilli [49].O le NLRP3 inflammasome e aʻafia i le atinaʻeina o faʻamaʻi eseese.O suʻesuʻega ua faʻaalia ai o le Pseudomonas aeruginosa e mafua ai le autophagy i macrophages e aloese ai mai le oti o le cell, ma o lenei faagasologa e faʻalagolago i le faʻagaoioia o le NLRP3 inflammasome [53].Mo le N. caninum, fa'ato'a fa'agaoioia ituaiga o le okesene fa'aosoina o le NLRP3 inflammasome fa'atapula'aina lona toe faia i totonu o le 'au, ma avea ai ma fa'amoemoega fa'apitoa fa'apitoa [9].Paracoccidioides brasiliensis ua maua e faʻaosoina ai le faʻagaioiina o le NLRP3 inflammasome i sela o le dendritic e maua mai i ponaivi ivi, e mafua ai le tuʻuina atu o le cytokine inflammatory IL-1β, lea e taua tele i le puipuiga o le talimalo [10].O le tele o ituaiga Leishmania, e aofia ai L. amazonensis, L. major, L. braziliensis, ma L. infantum chagasi, faʻagaoioia le NLRP3 ma le ASC-faʻalagolago i le caspase-1 i macrophages, faʻapea foʻi ma le faʻamaʻi Leishmania.E faʻaleleia le faʻaogaina o parasite i isumu e le atoatoa ile NLRP3 / ASC / caspase-1 gene [11].Zamboni et al.Leishmania faʻamaʻi ua lipotia mai e faʻaosofia ai le faʻagaioiina o le NLRP3 inflammasome i macrophages, lea e faʻatapulaʻaina ai le faʻaogaina o parasite intracellular.O le mea lea, Leishmania e mafai ona faʻalavelaveina le faʻagaioiina o le NLRP3 e avea o se fuafuaga e aloese ai.I suʻesuʻega in vivo, o le NLRP3 inflammasome na fesoasoani i le faʻaumatiaina o Leishmania, ae leʻi aʻafia ai masini [54].I le isi itu, i suʻesuʻega o le helminthiasis, o le faʻagaoioia o le NLRP3 inflammasome na taofia ai le puipuiga o le talimalo mai le gastrointestinal helminthiasis [12].O le Shigella o se tasi o siama autu e mafua ai le manava ile lalolagi atoa.O nei siama e mafai ona faʻaosofia le gaosiga o le IL-1β e ala i le P2X7 receptor-mediated K + efflux, ituaiga okesene reactive, lysosomal acidification, ma mitochondrial faaleagaina.O le NLRP3 inflammasome e le lelei le faʻatonutonuina o le phagocytosis ma le gaioiga faʻamaʻi o macrophages faasaga ia Shigella [55].O suʻesuʻega a le Plasmodium ua faʻaalia ai o le AIM2, NLRP3 poʻo le caspase-1 o isumu e aʻafia i le Plasmodium e maua ai le maualuga o le ituaiga 1 interferon ma e sili atu ona teteʻe i faʻamaʻi Plasmodium [56].Ae ui i lea, o le matafaioi a le alpha-2 giardine ma le alpha-7.3 giardine i le faʻamalosia o le faʻamalosia o le faʻamaʻi o le NLRP3 i isumu e le o manino.
I lenei suʻesuʻega, o le faʻasaina o le NLRP3 inflammasome e le MCC950 na faʻaitiitia ai le BW ma faʻateleina le numera o trophozoites i totonu o le manava o le intestinal i isumu, ma mafua ai ona sili atu le ogaoga o suiga o le pathological i le duodenal tissue.Alpha-2 giardine ma le alpha-7.3 giardine faʻagaoioia le host mouse NLRP3 inflammasome, faʻateleina le mamafa o le tino o le isumu, faʻaitiitia le numera o trophozoites i totonu o le intestinal lavage vai, ma faʻaitiitia le maʻi o le duodenal pathological.O nei taunuʻuga e taʻu mai ai e mafai e le G. duodenalis ona faʻagaoioia le NLRP3 host inflammasome e ala i le alpha-2 giardine ma le alpha-7,3 giardine, faʻaitiitia le pathogenicity o G. duodenalis i isumu.
Faʻatasi, o a matou taunuʻuga e faʻaalia ai o le alpha-2 ma le alpha-7.3 giardines e faʻaosoina ai le faʻagaioiina o le NLRP3 host inflammasome ma faʻaitiitia le faʻamaʻi o le G. duodenalis i isumu.O le mea lea, o nei molelaʻau o ni faʻamoemoega manuia mo le puipuia o giardiasis.
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
Liang AKS, Liang AAM, Huang AHC, Sergi KM, Kam JKM.Giardiasis: o se vaaiga lautele.Na fa'aalia talu ai nei o Pat Inflamm e ma'i i vaila'au.2019;13:134–43.
Escobedo AA, Tsimerman S. Giardiasis: o se toe iloiloga o pharmacotherapy.Manatu Tomai a le fomai talavai.2007;8: 1885–902.
Tian Huafeng, Chen Bin, Wen Jianfeng.Giardiasis, tetee atu i fualaau faasaina ma le mauaina o sini fou.Fa'ama'i fa'alavelave fa'atatau i vaila'au.2010;10:295–302.
Wang Z, Zhang X, Xiao Yi, Zhang W, Wu X, Qin T, ma isi NLRP3 faʻamaʻi ma faʻamaʻi pipisi.Oxide Med Cell Longev.2020;2020:4063562.
Chen GY, Núñez G. Le matafaioi a le inflammasome i le manava o le intestinal ma le kanesa.Gastroenterology.2011;141:1986–99.
Pellegrini C, Antonioli L, Lopez-Castejon G, Blandizzi C, Fornai M. Canonical ma atypical NLRP3 inflammasome activation i le fetaulaiga ala o le faapalepale puipuia ma gut inflammation.mua'i puipuia.2017;8:36.
Li L, Wang XC, Gong PT, Zhang N, Zhang X, Li S, et al.ROS-mediated NLRP3 inflammasome activation e aʻafia i le tali atu i N. caninum faʻamaʻi.Veta fa'ama'i.2020;13:449.