Faafetai mo le asiasi ile Nature.com.O le su'esu'ega o lo'o e fa'aogaina e fa'atapula'aina le lagolago a le CSS.Mo le poto sili ona lelei, matou te fautuaina oe e te faʻaogaina se suʻesuʻega fou (pe faʻamalo le Faiga Faʻatasi i Internet Explorer).I le taimi nei, ina ia mautinoa le faʻaauauina o le lagolago, matou te tuʻuina atu le saite e aunoa ma sitaili ma JavaScript.
Toxoplasma gondii ose intracellular protozoan parasite e faʻaogaina le microenvironment o le tagata faʻamaʻi ma e iloa e fesoʻotaʻi ma le aʻafiaga o le tupu aʻe o le faiʻai.I lenei suʻesuʻega, matou te faʻapea o le exosomal miRNA-21 mai faʻamaʻi Toxoplasma e faʻateleina ai le tuputupu aʻe o le faiʻai.Exosomes mai Toxoplasma-faʻamaʻi BV2 microglia na faʻaalia ma faʻamaonia totonu ole U87 glioma sela.Na su'esu'eina fa'amatalaga fa'amatalaga o le microRNA i le fa'aogaina o le microRNA ma le microRNA-21A-5p e feso'ota'i ma le Toxoplasma gondii ma le fa'avasegaina o le tuma.Na matou suʻesuʻeina foʻi le maualuga o le mRNA o kenera e fesoʻotaʻi ma le tuma i totonu o le U87 glioma sela e ala i le suia o le miR-21 maualuga i exosomes ma le aʻafiaga o exosomes i luga o le tagata U87 glioma cell proliferation.I exosomes o U87 glioma sela ua aʻafia i le Toxoplasma gondii, o le faʻaaliga o le microRNA-21 ua faʻateleina ma faʻaitiitia le gaioiga o genes antitumor (FoxO1, PTEN, ma le PDCD4).BV2-e maua mai exosomes ua a'afia i le Toxoplasma fa'atupuina le fa'ateleina ole U87 glioma sela.Exosome fa'aosoina le tuputupu a'e o sela U87 ile fa'ata'ita'iga o le tumo o le isumu.Matou te fautua atu o le faateleina o le exosomal miR-21 i le Toxoplasma-infected BV2 microglia e mafai ona faia se sao taua e avea o se faʻalauteleina o sela i totonu o le U87 glioma sela e ala i le faʻaitiitia o kenera antitumor.
E fa'atatau e silia ma le 18.1 miliona fa'ama'i o le kanesa maualuga na maua i le lalolagi atoa i le 2018, ma e tusa ma le 297,000 fatugalemu o le tino na maua i tausaga ta'itasi (1.6% o tuma uma)1.O suʻesuʻega talu ai ua faʻaalia ai o faʻalavelave faʻafuaseʻi mo le atinaʻeina o tuma o le faiʻai o tagata e aofia ai vailaʻau eseese, talaʻaga o aiga, ma faʻamaʻi faʻamaʻi mai le ulu faʻamaʻi ma meafaigaluega faʻapitoa.Ae ui i lea, o le mafuaʻaga tonu o nei faʻamaʻi e le o iloa.E tusa ma le 20% o kanesa uma i le lalolagi atoa e mafua mai i vailaau faʻamaʻi, e aofia ai siama, siama ma parasite3,4.O fa'ama'i fa'ama'i fa'alavelave e fa'alavelaveina ai faiga fa'atupu o le sela talimalo, e pei o le toe fa'aleleia o le DNA ma le ta'amilosaga o sela, ma e mafai ona o'o atu ai i le fula ma fa'aleagaina ai le tino5.
O fa'ama'i pipisi e feso'ota'i ma le kanesa o le tagata, o fa'ama'i fa'ama'i taatele ia, e aofia ai fa'ama'i papilloma a tagata ma fa'ama'i hepatitis B ma C.E mafai fo'i ona iai se sao o parasite i le atina'eina o le kanesa o le tagata.O le tele o ituaiga parasite, e pei o Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis ma Hymenolepis nana, ua aafia i ituaiga eseese o le kanesa o le tagata 6,7,8.
Toxoplasma gondii ose intracellular protozoan lea e faatonutonuina le microenvironment o sela talimalo ua pisia.O lenei parasite ua fuafuaina e a'afia ai pe tusa ma le 30% o le faitau aofa'i o le lalolagi, ma tu'u ai le faitau aofa'i atoa i se tulaga lamatia9,10.O le Toxoplasma gondii e mafai ona a'afia totoga taua, e aofia ai le fatugalemu o le tino (CNS), ma mafua ai ma'i tuga e pei o le maningitis e oti ai ma le encephalitis, ae maise i tagata mama'i e le atoatoa le puipuiga.Ae ui i lea, e mafai foi e le Toxoplasma gondii ona suia le siʻosiʻomaga o le tagata faʻamaʻi pipisi e ala i le faʻaogaina o le tuputupu aʻe o le sela ma le tali atu i le immunocompetent tagata taʻitoʻatasi, e oʻo atu ai i le tausia o se faʻamaʻi pipisi faʻamaʻi asymptomatic9,11.O le mea e malie ai, ona o le feso'ota'iga i le va o le T. gondii prevalence ma le tupu o le fai'ai tuma, o nisi lipoti ua fautua mai ai i vivo host suiga o le siosiomaga ona o le T. gondii faʻamaʻi masani e pei o le tumor microenvironment.
Exosomes ua lauiloa o fesoʻotaʻiga intercellular e tuʻuina atu mea olaola, e aofia ai polotini ma nucleic acids, mai sela tuaoi16,17.Exosomes e mafai ona aʻafia ai gaioiga faʻaola e fesoʻotaʻi ma le tumo e pei ole anti-apoptosis, angiogenesis, ma metastasis i le microenvironment tumo.Aemaise lava, miRNAs (miRNAs), laiti non-coding RNAs e uiga i le 22 nucleotides i le umi, e taua tele faʻatonuga faʻasologa o gafa e pulea le sili atu i le 30% o le mRNA tagata e ala i le miRNA-induced silencing complex (miRISC).Toxoplasma gondii e mafai ona faʻalavelaveina faʻagasologa o meaola e ala i le puleaina o faʻamatalaga o le miRNA i faʻamaʻi pipisi.Host miRNAs o loʻo iai faʻailoga taua mo le faʻatonutonuina o faʻagasologa o meaola ola e ausia ai le fuafuaga o le ola o le parasite.O le mea lea, o le suʻesuʻeina o suiga i le faʻailoga miRNA talimalo i luga o faʻamaʻi pipisi ma T. gondii e mafai ona fesoasoani ia i tatou ia malamalama atili i le fegalegaleaiga i le va o le talimalo ma le T. gondii.Ioe, Thirugnanam et al.15 fautua mai e T. gondii faʻamalosia le faiʻai o le carcinogenesis e ala i le suia o lona faʻaaliga i luga o miRNA faʻapitoa faʻapitoa e fesoʻotaʻi ma le tuputupu aʻe o le tumo ma maua ai e mafai e T. gondii ona mafua ai le gliomas i manu faʻataʻitaʻi.
O lenei suʻesuʻega e taulaʻi i le suiga o le exosomal miR-21 i le microglia talimalo ua aʻafia i le Toxoplasma BV2.Na matou matauina se tulaga talafeagai o le suiga o le exosomal miR-21 i le tuputupu aʻe o le U87 glioma sela ona o le taofia i totonu o le autu o FoxO1 / p27, o le sini lea o le overexpressed miR-21.
O Exosome na maua mai i le BV2 na maua mai i le faʻaogaina o le centrifugation eseese ma faʻamaonia e auala eseese e puipuia ai le faʻaleagaina i vaega feaveaʻi poʻo isi vesicles.SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) na faʻaalia ai mamanu maʻoti i le va o polotini na maua mai sela BV2 ma exosomes (Ata 1A), ma faʻataʻitaʻiga na iloiloina mo le i ai o Alix, lea na suʻesuʻeina e Western blotting of exosomal protein markers in.Na maua le fa'ailoga o le Alix i polotini fa'apitoa ae le'o maua i polotini lysate cell BV2 (Ata 1B).E le gata i lea, o le RNA mama mai exosomes na maua mai i le BV2 sa suʻesuʻeina e faʻaaoga ai se bioanalyzer.18S ma le 28S ribosomal subunits e seasea matauina i le exosomal RNA migration pattern, e faʻaalia ai le mama faʻatuatuaina (Ata 1C).Mulimuli ane, na fa'aalia e le microscopy electron transmission e tusa ma le 60-150 nm le lapopo'a o mea na matauina ma sa i ai se ipu-pei o le fausaga masani o exosome morphology (Fig. 1D).
Fa'ailoga o exosomes e maua mai sela BV2.(A) Pepa fa'amaumauga mo le saogalemu.O polotini na vavae ese mai sela BV2 poʻo exosomes na maua mai le BV2.E 'ese'ese mamanu polotini i le va o sela ma exosomes.(B) Su'esu'ega blot i Sisifo o se fa'ailoga exosomal (Alix).(C) Iloiloga ole RNA fa'amamāina mai sela BV2 ma BV2 e maua mai i fafo e fa'aaoga ai se bioanalyzer.O lea la, 18S ma 28S ribosomal subunits i sela BV2 e seasea maua i exosomal RNA.(D) Transmission electron microscopy na faaalia ai o exosomes vavae ese mai sela BV2 na leaga pisia i le 2% uranyl acetate.Exosome e tusa ma le 60-150 nm i le lapopoa ma foliga ipu (Pese ma Jung, faʻamaumauga e leʻi faʻasalalau).
O le faʻaogaina o le telefoni feaveaʻi o le BV2 e maua mai i fafo i totonu o le U87 tagata glioma sela na matauina i le faʻaogaina o le microscopy confocal.PKH26 fa'ailoga exosomes o lo'o fa'amauina i le cytoplasm o sela U87.Nuclei na pisia i le DAPI (Fig. 2A), o loʻo faʻaalia ai o exosomes e maua mai i le BV2 e mafai ona faʻaogaina e sela talimalo ma faʻamalosia le siosiomaga o sela e mauaina.
O le fa'alotoifaleina o le BV2 e maua mai i fafo i totonu o le U87 glioma sela ma le BV2 e maua mai i fafo e a'afia i le Toxoplasma RH fa'aosoina le fa'ateleina o le U87 glioma sela.(A) Exosomes ua lofia e sela U87 fuaina i le confocal microscopy.U87 glioma sela sa incubated i exosomes faailogaina i le PKH26 (mumu) pe leai se pulea mo 24 itula.O le nuclei na pisia i le DAPI (lanu moana) ona matauina lea i lalo o se microscope confocal (pa fua: 10 μm, x 3000).(B) U87 glioma cell proliferation na fuafuaina e ala ile su'esu'ega ole fa'atuputeleina.U87 glioma sela na togafitia i exosomes mo le taimi faʻaalia. *P <0.05 na maua ile su'ega t a Tamaiti. *P <0.05 na maua ile su'ega t a Tamaiti. *P <0,05 получено по t-критерию Стьюдента. *P <0.05 i le su'ega-t a Tamaiti aoga. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 maua mai ile su'ega t a Tamaiti.
Ina ua uma ona faʻamaonia le faʻaogaina o le BV2 e maua mai i fafo i totonu o le U87 glioma sela, na matou faia suʻesuʻega faʻateleina o le cell e suʻesuʻe ai le matafaioi a le BV2 e maua mai i le Toxoplasma i le atinaʻeina o sela glioma tagata.Togafitiga o sela U87 ma exosomes mai T. gondii-infected BV2 sela na faʻaalia ai o le T. gondii-infected BV2-derived exosomes na mafua ai le maualuga o le faʻalauteleina o sela U87 pe a faʻatusatusa i le pulea (Fig. 2B).
E le gata i lea, o le tuputupu aʻe o sela U118 e tutusa lava taunuuga e pei o le U87, ona o le Toxoplasma faʻaosofia exosomes na mafua ai le maualuga o le faʻateleina (faʻamatalaga e le o faʻaalia).Faʻavae i luga o nei faʻamaumauga, e mafai ona matou faʻaalia o le BV2-e maua mai i le Toxoplasma-faʻamaʻi pipisi o loʻo i ai se sao taua i le glioma cell proliferation.
Ina ia suʻesuʻeina le aʻafiaga o faʻamaʻi pipisi o le BV2 e maua i le Toxoplasma i luga o le tuputupu aʻe o le tuma, na matou tui ai le U87 glioma sela i isumu nude mo se xenograft faʻataʻitaʻiga ma tui BV2-e maua mai exosomes poʻo RH-faʻamaʻi BV2-e maua mai exosomes.Ina ua uma ona aliali mai tuma pe a maeʻa le 1 vaiaso, o vaega faʻataʻitaʻi taʻitasi o le 5 isumu na vaevaeina e tusa ai ma le tele o le tuma e iloa ai le mea e tasi e amata ai, ma fua le tele o le tuma mo le 22 aso.
I isumu faʻatasi ma le U87 xenograft faʻataʻitaʻiga, e sili atu le tele o le tumo ma le mamafa na matauina i le BV2 e maua mai i le RH-infected exosome group i le aso 22 (Fig. 3A,B).I le isi itu, e leai se eseesega tele i le lapopoa o le tumo i le va o le BV2-e maua mai le vaega exosome ma le vaega e pulea pe a uma togafitiga exosome.E le gata i lea, o isumu na tui i sela glioma ma exosomes na faʻaalia i le vaʻaia le tele o le tumo tele i le vaega o le RH-infected BV2-derived exosomes (Fig. 3C).O nei fa'ai'uga ua fa'aalia ai o le BV2 e maua mai i le Toxoplasma-a'afia o fafo e a'afia ai le tupu a'e o le glioma i se fa'ata'ita'iga o le tumo o le isumu.
Oncogenesis (AC) o le BV2-e maua mai exosomes i se U87 xenograft mouse faʻataʻitaʻiga.Ole tele ole Tumor (A) ma le mamafa (B) na matua fa'ateleina ile BALB/c nude isumu na togafitia ile RH-infected exosomes na maua mai i le BV2.BALB/c nude isumu (C) na tui subcutaneously ma 1 x 107 U87 sela taofia i Matrigel paluga.I le ono aso talu ona tui, 100 μg o BV2 na maua mai exosomes na togafitia i isumu.O le tele o le tumo ma le mamafa na fuaina i aso faʻaalia ma pe a maeʻa le taulaga. *P <0.05. *P <0.05. *Р <0,05. *P <0.05. *P <0.05. *P <0.05. *Р <0,05. *P <0.05.
O faʻamaumauga na faʻaalia ai o 37 miRNAs (16 overexpressed ma 21 downexpressed) e fesoʻotaʻi ma le puipuiga poʻo le tuputupu aʻe o le tumo na matua suia i microglia ina ua maeʻa faʻamaʻi pipisi i le Toxoplasma RH strain (Fig 4A).O tulaga faʻaalia o le miR-21 i totonu o miRNA ua suia na faʻamaonia e le RT-PCR taimi moni i exosomes e maua mai i le BV2, o le exosomes na togafitia i sela BV2 ma U87.O le faʻaaliga o le miR-21 na faʻaalia ai se faʻaopoopoga tele o exosomes mai sela BV2 ua aʻafia i le Toxoplasma gondii (RH strain) (Fig. 4B).O le maualuga o le faʻaaliga o le miR-21 i le BV2 ma le U87 sela na faʻateleina ina ua maeʻa le faʻaogaina o exosomes ua suia (Fig. 4B).O le maualuga o le faʻaaliga o le miR-21 i totonu o le faiʻai o tagata mamaʻi tuma ma isumu na aʻafia i le Toxoplasma gondii (ME49 strain) na maualuga atu nai lo le pulea, i le faasologa (Fig. 4C).O nei fa'ai'uga e feso'ota'i ma eseesega i le va o fa'amatalaga tulaga o va'aiga ma fa'amaonia microRNAs in vitro ma in vivo.
Suiga i le faʻaaliga o le exosomal miP-21a-5p i le microglia ua aʻafia i le Toxoplasma gondii (RH).(A) Fa'aalia suiga taua i le siRNA e feso'ota'i ma le fa'ama'i po'o le tuputupu a'e o le tuma pe a uma le T. gondii RH fa'ama'i.(B) Laasaga fa'atusa miR-21 na maua e le RT-PCR taimi moni i le BV2-e maua mai exosomes, BV2-togafitiga exosomes, ma U87 sela.(C) Sa maua le maualuga o fa'amatalaga miR-21 i totonu ole fai'ai o tagata mama'i tuma (N=3) ma isumu ua a'afia ile Toxoplasma gondii (ME49 strain) (N=3). *P <0.05 na maua ile su'ega t a Tamaiti. *P <0.05 na maua ile su'ega t a Tamaiti. *P <0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 na maua mai ile su'ega t a Tamaiti. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 maua mai ile su'ega t a Tamaiti.
Exosomes mai sela BV2 faʻamaʻi RH na taʻitaʻia ai le tuputupu aʻe o glioma i vivo ma in vitro (Ata. 2, 3).Ina ia iloa mRNAs talafeagai, sa matou suʻesuʻeina le maualuga o le mRNA o kenera taulaʻi faʻamaʻi, pusa ulu O1 (FoxO1), PTEN, ma le faʻaogaina o le cell death 4 (PDCD4) i sela U87 ua aʻafia i exosomes e maua mai i le BV2 poʻo le RH BV2.Bioinformatics suʻesuʻega ua faʻaalia ai o le tele o genes e fesoʻotaʻi i le tuma, e aofia ai le FoxO1, PTEN, ma le PDCD4 genes, o loʻo i ai nofoaga faʻapipiʻi miR-2121,22.O le maualuga o le mRNA o kenera taula'i antitumor na fa'aititia i le RH-fa'ama'i BV2 fa'atusa fa'atusatusa i le BV2-e maua mai exosomes (Fig. 5A).O le FoxO1 na faʻaalia le faʻaititia o le maualuga o le porotini i le RH-faʻamaʻi BV2 faʻataʻitaʻiga faʻatusatusa i le BV2-e maua mai exosomes (Ata 5B).Faʻavae i luga o nei faʻaiʻuga, e mafai ona matou faʻamaonia o exosomes e maua mai i le RH-faʻamaʻi BV2 faʻaitiitia le faʻatonutonuina o genes anti-oncogenic, faʻatumauina a latou matafaioi i le tuputupu aʻe o le tuma.
Toxoplasma RH-fa'ama'i BV2-e maua mai exosomes fa'aoso le taofiofia o genes antitumor i U87 glioma sela e Toxoplasma RH-a'afia BV2-e maua mai exosomes.(A) PCR taimi moni o FoxO1, PTEN ma PDCD4 faʻamatalaga i exosomes e maua mai i le T. gondii RH-faʻamaʻi BV2 faʻatusatusa i le PBS exosomes.β-actin mRNA na faʻaaogaina e fai ma pule.(B) FoxO1 faʻaaliga na faʻamoemoeina e ala i Western blotting ma faʻamaumauga o le densitometry na faʻavasegaina faʻamaumauga e faʻaaoga ai le polokalame ImageJ. *P <0.05 na maua ile su'ega t a Tamaiti. *P <0.05 na maua ile su'ega t a Tamaiti. *P <0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 na maua mai ile su'ega t a Tamaiti. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 maua mai ile su'ega t a Tamaiti.
Ina ia malamalama i le aʻafiaga o le miP-21 i exosomes i luga o le tumo-fesoʻotaʻi faʻatonu tulafono, U87 sela na faʻafeiloaʻi ma se inhibitor o le miP-21 faʻaaoga Lipofectamine 2000 ma sela na seleseleina i le 24 itula talu ona faʻafeiloaʻi.FoxO1 ma le p27 faʻaaliga maualuga i sela na faʻafeiloaʻi i le miR-21 inhibitors na faʻatusatusaina i sela na togafitia i le BV2 e maua mai i fafo e faʻaaoga ai le qRT-PCR (Fig. 6A, B).O le felauaiga o le inhibitor miR-21 i totonu o sela U87 na matua faʻaitiitia ai le faʻaaliga FoxO1 ma le p27 (FIG. 6).
RH-fa'ama'i exosomal BV2-e maua mai le miP-21 fa'aliliu FoxO1/p27 fa'aaliga i U87 glioma sela.U87 sela na faʻafeiloaʻi i le miP-21 inhibitor faʻaaoga Lipofectamine 2000 ma sela na seleseleina 24 itula talu ona tuʻuina atu.FoxO1 ma le p27 faʻaaliga maualuga i sela na faʻafeiloaʻi i le miR-21 inhibitors na faʻatusatusa i le maualuga o sela na togafitia i le BV2 e maua mai i fafo e faʻaaoga ai le qRT-PCR (A, B).
Ina ia sola ese mai le tali atu a le tagata talimalo, o le Toxoplasma parasite e liua i se kisi o le tino.Latou te fa'asalaina aano eseese, e aofia ai le fai'ai, fatu, ma maso skeletal, i le olaga atoa o le tagata talimalo ma fa'aogaina le tali atu a le tagata talimalo.E le gata i lea, e mafai ona latou faʻatonutonuina le taamilosaga o le cell ma apoptosis o sela talimalo, faʻalauteleina lo latou faʻateleina14,24.Toxoplasma gondii e masani ona afaina ai sela dendritic talimalo, neutrophils, ma monocyte / macrophage gafa, e aofia ai microglia faiʻai.Toxoplasma gondii e faʻaosofia ai le eseesega o macrophages o le M2 phenotype, e aʻafia ai le faʻamalolo manuʻa pe a maeʻa faʻamaʻi pipisi, ma e fesoʻotaʻi foi ma le hypervascularization ma le granulomatous fibrosis.O lenei pathogenesis o amioga o le Toxoplasma faʻamaʻi e mafai ona fesoʻotaʻi ma faʻailoga e fesoʻotaʻi ma le tuputupu aʻe o le tuma.Ole si'osi'omaga leaga e fa'atulafonoina e Toxoplasma e ono foliga tutusa ma le fa'ama'i.O le mea lea, e mafai ona manatu o le Toxoplasma faʻamaʻi e tatau ona fesoasoani i le atinaʻeina o le faiʻai tuma.O le mea moni, o le maualuga o fua faatatau o Toxoplasma faʻamaʻi ua lipotia mai i le sua o tagata mamaʻi e maua i le faiʻai tuma eseese.E le gata i lea, o le Toxoplasma gondii e mafai ona avea ma se isi faʻamaʻi pipisi ma galue faʻatasi e fesoasoani ai i isi faʻamaʻi pipisi e atiaʻe tuma o le faiʻai.I lenei tulaga, e taua le matauina o le P. falciparum ma le Epstein-Barr virus synergistically saofagā i le fausiaina o le lymphoma a Burkitt.
O le matafaioi a exosomes e fai ma faʻatonuga i le matata o suʻesuʻega o le kanesa ua maeʻa suʻesuʻeina.Ae ui i lea, o le matafaioi a exosomes i le va o parasite ma faʻamaʻi pipisi e tumau pea le le malamalama lelei.E oʻo mai i le taimi nei, o tulafono faatonutonu eseese, e aofia ai polotini natia, ua faʻamatalaina le faʻagasologa o meaola e mafai ai e parasites protozoan ona tetee atu i osofaʻiga a le talimalo ma faʻaauau ai faʻamaʻi.Talu ai nei, o loʻo i ai se manatu faʻatupulaia o microvesicles e fesoʻotaʻi ma protozoan ma a latou microRNA e fegalegaleai ma sela talimalo e fausia ai se siosiomaga lelei mo lo latou ola.O le mea lea, e manaʻomia nisi suʻesuʻega e suʻesuʻe ai le sootaga i le va o le exosomal miRNA ua suia ma le faʻateleina o le glioma cell.Suiga MicroRNA (fa'ato'aga genes miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 ma miR-17-92) e fusifusia i le STAT3 fa'alauiloa i le toxoplasma-a'afia macrophages tagata, e fa'atulafonoina ma fa'aosofia ai le anti. -apoptosis e tali atu i faʻamaʻi Toxoplasma gondii 29 .Toxoplasma faʻamaʻi faʻateleina le faʻaalia o le miR-17-5p ma le miR-106b-5p, lea e fesoʻotaʻi ma le tele o faʻamaʻi hyperproliferative 30 .O nei faʻamatalaga o loʻo fautua mai ai o miRNA talimalo e faʻatulafonoina e Toxoplasma faʻamaʻi o ni mole taua mo le ola parasite ma le pathogenesis i amioga olaola.
O miRNA ua suia e mafai ona aʻafia ai ituaiga o amioga i le taimi o le amataina ma le alualu i luma o sela leaga, e aofia ai gliomas: faʻaogaina o le tagata lava ia o faailoilo tuputupu aʻe, le mautonu i faailoilo faʻalavelave tuputupu aʻe, apoptosis evasion, le faʻatapulaʻaina replicative gafatia, angiogenesis, osofaʻiga ma metastasis, ma le mumū.I le glioma, o miRNA ua suia ua iloa i le tele o suʻesuʻega faʻamatalaga faʻamatalaga.
I le suʻesuʻega nei, na matou faʻamaonia le maualuga o le miRNA-21 faʻamatalaga i le toxoplasma-aʻafia i sela talimalo.miR-21 ua faʻailoaina o se tasi o microRNAs e sili ona faʻaalia i taimi uma i tumo malo, e aofia ai gliomas, 33 ma o lona faʻaaliga e fesoʻotaʻi ma le vasega o le glioma.O le faʻaputuina o faʻamaoniga e taʻu mai ai o le miR-21 o se tala fou oncogene e galue o se mea e tetee i le apoptotic i le tuputupu aʻe o le glioma ma e sili atu ona faʻaalia i totonu o masini ma plasma o faʻamaʻi o le faiʻai o le tagata.O le mea e malie ai, o le le faʻaaogaina o le miR-21 i sela glioma ma masini e mafua ai le faʻalavelaveina o le faʻateleina o le cell ona o le apoptosis faʻalagolago i le caspase.Bioinformatic suʻesuʻega o le miR-21 faʻamoemoe na faʻaalia na faʻaalia ai le tele o genes suppressor tumo e fesoʻotaʻi ma ala o apoptosis, e aofia ai le faʻaogaina o le cell death 4 (PDCD4), tropomyosin (TPM1), PTEN, ma le atigipusa pusa O1 (FoxO1), faʻatasi ai ma le nofoaga faʻapipiʻi miR-2121..22.38.
O le FoxO1, o se tasi o fa'amatalaga tusitusia (FoxO), o lo'o a'afia i le atina'eina o ituaiga eseese o le kanesa o le tagata ma e mafai ona fa'atonutonuina le fa'aaliga o genes suppressor tumo e pei ole p21, p27, Bim, ma le FasL40.FoxO1 e mafai ona fusifusia ma faʻagaoioia le faʻaogaina o le taamilosaga e pei o le p27 e taofia ai le tuputupu aʻe o sela.E le gata i lea, o le FoxO1 o se faʻamatalaga autu o le PI3K / Akt faʻailoga ma faʻatonutonu le tele o gaioiga faʻapitoa e pei o le alualu i luma o le taamilosaga ma le eseesega o le cell e ala i le faʻagaoioia o le p2742 transcription.
I le faaiuga, matou te talitonu o le exosomal miR-21 e maua mai i le Toxoplasma-infected microglia e mafai ona faia se sao taua o se faʻatonuga o le tuputupu aʻe o sela glioma (Fig. 7).Ae ui i lea, e manaʻomia nisi suʻesuʻega e suʻe ai se fesoʻotaʻiga tuusaʻo i le va o le exosomal miR-21, suiga o le Toxoplasma faʻamaʻi, ma le tuputupu aʻe o le glioma.O nei faʻaiʻuga e faʻamoemoe e maua ai se amataga mo le suʻesuʻeina o le va o le Toxoplasma faʻamaʻi ma le aʻafiaga o le glioma.
O se ata faʻataʻitaʻiga o le faiga o le glioma (faiʻai) carcinogenesis o loʻo tuʻuina atu i lenei suʻesuʻega.Ua tusia e le tusitala le PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA).
O faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga uma i lenei suʻesuʻega, e aofia ai le faʻaogaina o manu, na tusa ai ma le Seoul National University Animal Care and User Committee Standard Ethical Guidelines ma na faʻamaonia e le Komiti Faʻatonu a le Seoul National University School of Medicine (IRB numera SNU- 150715).-2).O fa'ata'ita'iga uma na fa'atinoina e tusa ai ma fautuaga ARRIVE.
BV2 mouse microglia ma U87 tagata glioma sela na faʻatupuina i le Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM; Welgene, Seoul, Korea) ma le Roswell Park Memorial Institute's Medium (RPMI; Welgene), taʻitasi, o loʻo iai le 10% fetal bovine serum, 4 mM l- glutamine, 0.2 mM penicillin ma 0.05 mM streptomycin.O sela sa fa'atupuina ile incubator ma le 5% CO2 ile 37°C.O le isi glioma cell line, U118, na faʻaaogaina mo le faʻatusatusaina o sela U87.
Ina ia faʻaesea exosomes mai T. gondii-infected RH ma ME49 strains, T. gondii tachyzoites (RH strain) na seleseleina mai le manava o le 6-vaiaso le matua BALB / c isumu tui 3-4 aso muamua.Tachyzoites na fufulu faatolu i le PBS ma faʻamamaina e ala ile centrifugation ile 40% Percoll (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)43.Ina ia maua tachyzoites o galu ME49, BALB / c isumu na tui intraperitoneally i 20 tissue cysts ma tachyzoite suiga i cysts na aoina e ala i le fufuluina o le manava manava i le 6-8th aso pe a uma le siama (PI).Isu ua a'afia ile PBS.ME49 tachyzoites na tupu aʻe i sela faʻaopoopo i le 100 μg / ml penicillin (Gibco / BRL, Grand Island, NY, ISA), 100 μg / ml streptomycin (Gibco / BRL), ma le 5% fetal bovine serum (Lonza, Walkersville, MD) .., ISA) i le 37 °C ma le 5% carbon dioxide.Ina ua maeʻa le totoina i totonu o sela Vero, na pasi faalua ME49 tachyzoites i se nila 25 gauge ona sosoo ai lea ma se faamama 5 μm e aveese ai otaota ma sela.A maeʻa ona fufulu, na toe faʻamauina le tachyzoites i le PBS44.Tissue cysts o Toxoplasma gondii strain ME49 na tausia e ala i tui intraperitoneal o cysts vavae ese mai le faiʻai o le C57BL / 6 pipi (Orient Bio Animal Center, Seongnam, Korea).O le fai'ai o isumu na a'afia i le ME49 na seleseleina pe a mae'a le 3 masina o le PI ma fa'asalaina i lalo o le microscope e fa'aesea ai cysts.O isumu na a'afia sa tausia i lalo o tulaga fa'apitoa e leai se pathogen (SPF) i le Seoul National University School of Medicine.
Ole aofa'i ole RNA na maua mai i fafo ole BV2, sela BV2 ma masini e fa'aaoga ai le miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Siamani) e tusa ai ma fa'atonuga a le kamupani gaosi oloa, e aofia ai le taimi o le fa'atosina mo le la'asaga o le elution.Ole fa'atonuga ole RNA na fa'amauina ile NanoDrop 2000 spectrophotometer.O le lelei o RNA microarrays na suʻesuʻeina e faʻaaoga ai le Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent Technologies, Amstelveen, Netherlands).
DMEM faʻatasi ma le 10% exosome-mativa FBS na saunia e le ultracentrifugation i le 100,000g mo 16 itula i le 4 ° C ma faʻamamaina e ala i le 0.22 μm faamama (Nalgene, Rochester, NY, ISA).BV2 sela, 5 × 105, na faʻatupuina i le DMEM o loʻo iai le 10% exosome-depleted FBS ma 1% antibiotic i le 37 ° C ma le 5% CO2.A maeʻa le 24 itula o faʻamaʻi, tachyzoites o faʻalavelave RH poʻo ME49 (MOI = 10) na faʻapipiʻiina i sela ma faʻamalo ese parasites i totonu o le itula ma toe faʻatumu i le DMEM.Exosomes mai sela BV2 na faʻamavaeina e ala i suiga faʻavasega centrifugation, o le auala sili ona faʻaaogaina.Toe tu'u le pellet i le 300 µl PBS mo le su'esu'eina o le RNA po'o le porotini.O le faʻaogaina o mea faʻapitoa na faʻamoemoeina e faʻaaoga ai le BCA protein assay kit (Pierce, Rockford, IL, USA) ma le NanoDrop 2000 spectrophotometer.
O mafui'e mai sela BV2 po'o mea fa'aola na maua mai i le BV2 na fa'amama i le PRO-PREP ™ vaifofo e fa'aosoina ai porotini (iNtRon Biotechnology, Seongnam, Korea) ma fa'apipi'i atu polotini i luga o Coomassie lanu moana lanu moana 10% SDS polyacrylamide gels.E le gata i lea, o polotini na faʻafeiloaʻi i le PVDF membranes mo le 2 itula.O paʻu i Sisifo na faʻamaonia i le faʻaaogaina o le Alix antibody (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, ISA) o se faʻailoga exosomal.HRP-conjugated 'oti anti-mouse IgG (H + L) (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, ISA) ma le LAS-1000 faʻatasi ai ma le suʻesuʻeina ata (Fuji Photographic Film, Tokyo, Iapani) na faʻaaogaina e fai ma antibody lona lua..Fa'aliliuina electron microscopy sa faia e su'esu'e le tele ma le morphology o exosomes.O mea faʻapitoa na vavae ese mai sela BV2 (6.40 μg / μl) na saunia i luga o mata o le carbon-coated meshes ma leaga le pisia i le 2% uranyl acetate mo le 1 min.O faʻataʻitaʻiga saunia na matauina i le faʻavaveina o le voltage o le 80 kV e faʻaaoga ai le JEOL 1200-EX II (Tokyo, Iapani) faʻapipiʻiina i le ES1000W Erlangshen CCD kamera (Gatan, Pleasanton, CA, ISA).
BV2-na maua mai exosomes na pisia i le faaaogaina o le PKH26 Red Fluorescent Linker Kit (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ISA) mo minute 15 i le vevela o le potu.U87 sela, 2 × 105, faʻatasi ai ma le PKH26-labeled exosomes (lanu mumu) poʻo le leai o se faʻamaʻi e pei o se pulega le lelei, na faʻapipiʻiina i le 37 ° C mo 24 itula i le 5% CO2 incubator.U87 cell nuclei na pisia i le DAPI (lanu moana), U87 sela na faʻamauina i le 4% paraformaldehyde mo le 15 min i le 4 ° C ona suʻeina lea i le Leica TCS SP8 STED CW confocal microscope system (Leica Microsystems, Mannheim, Siamani).mata'ina.
O le cDNA na faʻapipiʻiina mai le siRNA e faʻaaoga ai le Mir-X siRNA faʻasologa muamua ma le SYBR qRT-PCR kit (Takara Bio Inc., Shiga, Iapani).Ole PCR ole taimi moni na fa'atinoina ile fa'aogaina ole iQ5 ole faiga ole su'esu'ega ole PCR (Bio-Rad, Hercules, CA, ISA) e fa'aaoga ai fa'ata'ita'iga ma fa'ata'ita'iga fa'afefiloi ma le SYBR Premix.O le DNA na faʻateleina mo le 40 taamilosaga o le denaturation i le 95 ° C mo le 15 s ma faʻamaʻi i le 60 ° C mo le 60 s.O fa'amaumauga mai tali ta'itasi PCR na su'esu'eina e fa'aaoga ai le fa'avasegaina o fa'amaumauga o le iQ™5 masini komepiuta (Bio-Rad).O suiga fa'atatau ile fa'aaliga o le kenera i le va o kenera fa'atatau ua filifilia ma le β-actin/siRNA (ma le U6) na fa'atatauina i le fa'aogaina o le auala fa'asolosolo masani.O fa'asologa muamua o lo'o fa'aaogaina o lo'o fa'aalia i le Laulau 1.
3 x 104 U87 glioma sela na fatu i 96-well plates ma fefiloi ma Toxoplasma-infected exosomes na maua mai le BV2 (50 μg / mL) poʻo le nonpulse exosomes e maua mai i le BV2 (50 μg / mL) e pei o le pulea i 12, 18 ma 36 itula .O le fua o le faʻateleina o le cell na faʻamoemoeina e faʻaaoga ai le Cell Counting Kit-8 (Dojindo, Kumamoto, Iapani) (Faʻaopoopo Faʻamatalaga S1-S3) 46 .
5-vaiaso le matua fafine BALB / c nude isumu na faʻatau mai Orient Bio (Seongnam-si, Korea i Saute) ma teuina taʻitoʻatasi i totonu o fale puipui i le vevela o le potu (22 ± 2 ° C) ma le susu (45 ± 15 ° C).%) ile vevela ole potu (22±2°C) ma le susu (45±15%).O se taamilosaga malamalama 12-itula ma se taamilosaga pogisa 12-itula na faia i lalo o le SPF (Seoul National University School of Medicine Animal Center).O isumu na vaevaeina faʻafuaseʻi i ni vaega se tolu o le 5 mice taʻitasi ma o vaega uma na tui i lalo i le 400 ml o le PBS o loʻo i ai 1 x 107 U87 glioma sela ma faʻaititia le faʻatupulaia o le BD Matrigel ™ (BD Science, Miami, FL, ISA).I le ono aso talu ona tui le tumo, 200 mg o exosome na maua mai sela BV2 (e iai/e aunoa ma le Toxoplasma faʻamaʻi) na tui i totonu o le nofoaga o le tuma.Luasefulu-lua aso talu ona maeʻa faʻamaʻi pipisi, o le tele o le tumo o isumu i vaega taʻitasi na fuaina i se caliper faʻatolu i le vaiaso, ma o le maualuga o le tumo na faʻatatauina i le fua faʻatatau: 0.5 × (lautele) × 2 × umi.
Su'esu'ega fa'amatalaga MicroRNA e fa'aaoga ai le miRCURYTM LNA miRNA array, 7th generation has, mmu and rno arrays (EXIQON, Vedbaek, Tenimaka) e aofia ai 1119 lelei-fa'ailoga isumu i totonu ole 3100 tagata, isumu ma isumu miRNA pu'e su'ega.I le taimi o lenei faiga, 250 i le 1000 ng o le RNA atoa na aveesea mai le 5'-phosphate e ala i togafitiga ma le phosphatase alkaline intestinal povi ma sosoo ai ma le faʻailogaina i le Hy3 lanu meamata lanu meamata.O fa'ata'ita'iga fa'aigoaina na fa'apipi'iina lea e ala i le utaina o ata fa'ata'ita'i e fa'aaoga ai se pusa fa'ameamea (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, ISA) ma se pusa fa'ase'ese'ese (Agilent Technologies).Sa faia le faʻaogaina mo le 16 itula i le 56 ° C, ona fufuluina lea o microarrays e tusa ai ma fautuaga a le gaosiga.O fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'i fa'ata'ita'i na fa'ata'ita'iina ona fa'aaogaina lea o le masini su'esu'e microarray Agilent G2565CA (Agilent Technologies).Na fa'aulufale mai ata va'aia e fa'aaoga ai le Agilent Feature Extraction software version 10.7.3.1 (Agilent Technologies) ma o le malosi o le fluorescence o ata ta'itasi na fa'atatauina i le fa'aogaina o le faila GAL talafeagai o le fa'asologa o le Exiqon ua suia.O faʻamatalaga Microarray mo suʻesuʻega o loʻo i ai nei o loʻo teuina i totonu o le GEO database i lalo ole numera o le GPL32397.
O faʻamatalaga faʻamatalaga o miRNAs exosomal matutua i microglia o RH poʻo ME49 strains na aʻafia i le Toxoplasma na suʻesuʻeina e faʻaaoga ai meafaigaluega fesoʻotaʻiga eseese.miRNAs e fesoʻotaʻi ma le tuputupu aʻe o le tumo na faʻaalia i le faʻaaogaina o le miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) ma faʻamama faʻatasi ma le malosi faʻamaonia masani (log2) sili atu i le 8.0.I totonu o miRNAs, o miRNAs fa'aalia ese'ese na maua e sili atu nai lo le 1.5-fa'aiga ua suia e ala i su'esu'ega fa'amama o miRNA ua suia e RH po'o ME49 strains ua a'afia i le T. gondii.
O sela na totoina i totonu o ipu e ono-vai (3 x 105 sela / vaieli) i opti-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, ISA) faʻaaogaina Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, ISA).O sela na a'afia na fa'atupuina mo le 6 itula ona suia lea o le ala ile fou fou.O sela na seleseleina i le 24 itula talu ona uma le felauaiga.
Sa masani ona faia su'esu'ega fa'amaumauga i le fa'aaogaina o le su'ega a Tamaiti a'oga ma le polokalama Excel (Microsoft, Washington, DC, ISA).Mo suʻesuʻega faʻataʻitaʻiga manu, na faia se ANOVA e lua auala e faʻaaoga ai le Prism 3.0 software (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA). P-values ​​<0.05 na faʻatatauina o fuainumera taua. P-values ​​<0.05 na faʻatatauina o fuainumera taua. Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P tau <0.05 sa manatu fa'amauina taua. P < 0.05 被认为具有统计学意义。 P <0.05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P tau <0.05 sa manatu fa'amauina taua.
O faʻataʻitaʻiga faʻataʻitaʻiga uma na faʻaaogaina i lenei suʻesuʻega na faʻamaonia e le Komiti Faʻatonu a le Ofisa o le Seoul National University School of Medicine (IRB numera SNU-150715-2).
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
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